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[目 的]本实验通过收集膀胱癌患者的临床样本筛选出差异性表达的分子,通过体外试验和体内实验研究Hac-circ-0005777海绵吸附miR-1305促进膀胱癌发生发展的机制,为发掘膀胱癌诊断、治疗和预后的分子标志物提供实验依据。[方法]1.RT-PCR筛选47例膀胱癌临床样本中差异性表达的CircRNA,分析其在膀胱癌临床分期、分级中的表达量;2.琼脂糖凝胶实验和RNaseR实验验证差异性表达的Hac-circ-0005777为CircRNA;3.通过测序和网站预测验证Hac-circ-0005777序列一致性;4.通过RT-PCR验证Hac-circ-0005777干扰、过表达的效率,CCK8实验检测细胞活力,克隆实验检测克隆形成能力,伤口愈合实验、转移实验验证膀胱癌细胞转移;体内实验验证Hac-circ-0005777成瘤能力;5.核浆分离实验和FISH荧光实验确定Hac-circ-0005777在细胞中的定位;6.Circ Bank、Circ MIR、Circ Interaome 预测和 RNA Pudown 实验筛选Hac-circ-0005777结合可能性最大的miRNA;7.miRDB、Targescan等网站预测下游结合的分子,热图提示结合下游分子;8.Western Blot确定蛋白的表达量。[结 果]1.RT-PCR提示:Hac-circ-0005777在癌旁低表达、癌组织中高表达,在Ta/Tis/T1-2期高表达,在低分期中高表达,差异有统计学意义(P<0.05);2.琼脂糖凝胶电泳实验和RNaseR实验证实:Hac-circ-0005777为CircRNA,测序和网站预测Hac-circ-0005777序列相同;3.体外实验证实:Hac-circ-0005777 Si抑制膀胱癌的进展、Hac-circ-0005777促进膀胱癌的发展、miR1305抑制膀胱癌的发展;动物实验表明Hac-circ-0005777促进膀胱肿瘤的形成,差异有统计学意义(P<0.05);4.核浆分离实验和FISH荧光实验示:Hac-circ-0005777位于细胞质;5.Circ Bank、Circ MIR、Circ Interaome 预测和 RNA Pudown 实验筛选是Hac-circ-0005777 与 miRNA1305 结合可能性最大;6.miRDB、Targescan等网站预测和热图提示:Hac-circ-0005777下游分子是TGF-β2:7.Western Blot 示:Hac-circ-0005777 上调 TGF-β2 的表达、miRNA1305 下调TGF-β2的表达。[结 论]1.Hac-circ-0005777通过海绵吸附miRNA1305上调TGF-β 2促进膀胱癌的发生发展2.Hac-circ-0005777促进膀胱癌的发生发展,miRNA 1305抑制膀胱癌的进展;3.Hac-circ-0005777 上调 TGF-β2 的表达、miRNA1305 下调 TGF-β2 的表达;4.Hac-circ-0005777在癌组织高表达,在癌旁组织中低表达,在低分级、低分期膀胱癌中高表达;5.Hac-circ-0005777 是一个 CircRNA,位于细胞质中;