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目的:PLGA是一种新型的药物载体,用作抗原的载体可以控制抗原的释放,接种机体后能诱导持续的免疫应答。蟑螂是最主要的吸入性变应原之一。国外的研究表明,对蟑螂变应原过敏和哮喘的发病相关,37%的哮喘儿童和48%的哮喘成人对蟑螂变应原过敏。Blag2是德国小蠊变应原的主要致敏蛋白组分之一,研究发现Blag2能引起60%-80%的德国小蠊变应原过敏病人的IgE反应。本研究通过基因工程表达与纯化重组德国小蠊Blag2变应原,建立重组德国小蠊Blag2变应原(rBlag2)诱导的小鼠气道变态反应炎症动物模型;在建立rBlag2诱导的小鼠气道变态反应炎症动物模型基础上探讨重组德国小蠊变应原Blag2-PLGA纳米疫苗对重组Blag2变应原诱导的变态反应性气道炎症的免疫保护作用,探讨rBlag2-PLGA纳米疫苗在支气管哮喘抗原特异性免疫治疗中的机制。
内容与方法:本研究分二个部分进行:第一部分:在大肠杆菌中诱导表达Blag2重组蛋白,用镍亲和柱层析法提纯重组蛋白;24只Balb/c小鼠随机分为德国小蠊粗浸液组(A组)、德国小蠊粗浸液+重组Blag2组(B组)、重组Blag2(C组)、阴性对照组(D组)。分别通过HE染色和PAS染色(PeriodicAcid-Schiff)观察小鼠肺部炎症和粘液分泌;观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和细胞分类;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF、脾细胞培养上清的细胞因子和血清rBlag2特异的IgE、IgG1、IgG2a抗体。
第二部分:在rBlag2对BALB/c小鼠腹腔致敏后,分别以rBlag2-PLGA、rBlag2、空白纳米、PBS皮下注射进行治疗,然后以rBlag2滴鼻激发,最后一次激发48小时后,处死小鼠,通过HE染色和PAS染色(PeriodicAcid-Schiff)观察小鼠肺部炎症和粘液分泌;观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和细胞分类;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF、脾细胞培养上清的细胞因子和血清rBlag2特异的IgE、IgG1、IgG2a抗体。
结果:1.成功表达、纯化Blag2重组蛋白;A、B与C组肺部病理改变呈现明显的变态反应性炎症;BALF中的细胞总数、中性粒细胞数、EOS计数、IL-4,血清抗原特异性IgE抗体、IgG1抗体和脾细胞分泌IL-4均显著高于正常组D组(P<0.01)。
2.rBlag2-PLGA纳米治疗能有效抑制变应原诱导的肺部炎症细胞浸润和粘液分泌;降低BALF中IL-4浓度,并有效增加IFN-γ的浓度;抑制抗原特异性IgE、IgG1抗体产生,上调了IgG2a抗体的水平;而且,rBlag2-PLGA纳米治疗组的小鼠脾细胞,体外培养在rBlag2的刺激下分泌Th1细胞因子IFN-γ、IL-10增加。
结论:1.用rBlag2能成功建立小鼠气道变态反应性炎症动物模型。
2.rBlag2-PLGA纳米疫苗治疗减轻了rBlag2致敏激发的小鼠气道炎症及调节了TH1、TH2的平衡。