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新城疫(Newcastle Disease，ND)，是由新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)引起的一种高度接触性、急性败血性传染病，主要侵害鸡和火鸡，被国际兽疫局(OIE)列为A类动物疫病。我国采取以免疫为主的综合性防制措施，在一定程度上控制了ND的大规模流行，但该病仍然是目前危害我国禽类的重大传染病之一。因此，对NDV分子流行病学的监控，可以明确我国NDV毒株的流行、变异趋势，对于ND综合防制措施的调整有重要的现实意义。 本研究于2010～2011年间从国内9个省市采集到61份疑似新城疫病毒感染病料，并进行研磨冻融处理，接种9-11日龄SPF鸡胚的方法进行病毒分离，通过血清学和RT-PCR方法，分离鉴定出了40株新城疫病毒。本研究测定了分离株(CK-HBC1-201004和CK-GXG3-201005株)的生物学特性：鸡胚平均死亡时间(MDT)均小于60h；1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)均大于1.6；对30日龄SPF鸡攻毒实验致死率均为100％，可见这两株病毒属于强毒株。 本研究对40株NDV F基因进行了克隆、序列测定分析。结果表明，所有NDV分离株F基因ORF长度为1662nt，编码553个氨基酸，没有出现核苷酸的插入和缺失。分离株分别属于基因Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅶd(亚)型。基因Ⅰ型(1/40)、Ⅱ型(13/40)和Ⅲ型(2/40)分离株占40％，与我国使用的疫苗株间核苷酸同源性在999/0以上，可能来源于疫苗株或疫苗变异株；基因Ⅶd亚型(24/40)分离株占60％，与我国普遍流行的基因Ⅶd亚型亲缘关系较近，说明目前我国的NDV流行毒株以基因Ⅶd型为主。裂解位点分析显示，其中26株符合强毒株氨基酸序列特征，14株符合弱毒株氨基酸序列特征。F蛋白功能区分析发现，所有分离株F蛋白糖基化位点及半胱氨酸残基均高度保守，说明本研究中的分离株F基因重要功能区未发生重大变异。 参考GenBank中公布的相关全基因组序列，设计了9对特异性引物，扩增获得了CK-GDX2-201006、CK-HBC1-201004、CK-GXG3-201005和CK-JSX1-2010054株NDV毒株全基因组序列，长度均为15192nt，符合副粘病毒的“六碱基规则”。整个基因组由Leader序列(55nt)，NP蛋白序列(489aa)，P蛋白序列(395aa)，M蛋白序列(364aa)，F蛋白序列(553aa)，HN蛋白序列(571aa)，L蛋白序列(2204aa)和Trailer序列(144nt)以及各个基因之间的间隔序列组成。此4株毒株与弱毒疫苗株LaSota、B1，中等毒力疫苗株Mukteswar以及强毒株F48E8的同源性较低(82.5％～88.4％)，而与国内分离株ZJ1等5株序列长度为15192bp的基因Ⅶ型毒株同源性较高(95.0％～97.5％)。 为了研究NDV毒株之间的交叉保护能力，本研究选取了5株在遗传距离和抗原性差异较大的毒株，分别制备灭活疫苗，以CK-HBC1-201004株作为攻毒毒株。免疫后21天，各免疫组均产生了较高水平的抗体。攻毒后，攻毒对照组在6d内全部死亡，空白对照组及各实验组均未出现发病及死亡病例。用RT-qPCR法在对各组的样品的检测结果显示：Lasota和Mukteswar免疫组样品的总体阳性率显著高于CK-HBC1-201004和CK-GXG3-201005免疫组。本研究表明，遗传距离和抗原性有差异的疫苗毒株，均能对流行毒株提供100％的保护，但对鸡群感染后排毒的抑制能力有影响，而且这种抑制能力和疫苗株与流行株之间的遗传距离和抗原性的差异大小呈负相关。