基于CRISPR-Cas12a的端粒酶一步法检测新技术研究

来源 :重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:baichunbo
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端粒酶作为能调控真核生物端粒长度的DNA蛋白酶复合物,其活性与多种肿瘤的进程相关,因而被认为是一种新兴的肿瘤诊断标志物。因此,迫切需要一种简便、快速、灵敏并具有床旁诊断(POC)潜力的检测端粒酶活性的方法。在此,我们建立了一种基于端粒合成激活的CRISPR-Cas12a系统一体化检测端粒酶活性的方法。端粒酶延伸反应产生端粒重复序列(TTAGGG)n,同时被一个定制的CRISPR引导RNA(cr RNA)识别,最后激活了的基于Cas12a-cr RNA的反式切割活性恢复荧光探针信号。由于CRISPR-Cas12a固有的灵敏度,这种方法在100到2000个He La细胞范围之间实现了很好的线性回归,并且检测限可达到26个He La细胞。此外,该方法可以在恒温(37℃)条件下,通过一个简单快速的工作流程(一小时内一个步骤)在一个反应体系中检测端粒酶。由于其优异的性能,这种一体化的方法在床旁检测端粒酶活性方面显示出巨大的潜力。
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