论文部分内容阅读
目的探讨牛磺酸（taurine,TAU）对高脂饮食（high-fat diet,HFD）诱导的非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）大鼠肝脏和回肠组织白细胞介素（interleukin,IL）-17等细胞因子表达的影响以及对肠黏膜屏障功能的干预作用。方法40只SD雄性大鼠随机分为5组:正常对照组（I组,n=8）:普通饮食+纯净水灌胃;正常预防组（II组,n=8）:普通饮食+牛磺酸灌胃;HFD模型组（III组,n=8）:高脂饮食+纯净水灌胃;TAU预防组（IV组,n=8）:高脂饮食+牛磺酸灌胃;TAU治疗组（V组,n=8）:高脂饮食,并在造模成功后（第11周）开始给予牛磺酸灌胃。第16周末结束建模,收集各组大鼠血液、粪便、肝脏和回肠组织样本。称量各组大鼠体重、肝湿重,计算肝指数;腹主动脉取血,检测丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）、胆固醇（cholesterol,CHO）、甘油三酯（triglyceride,TG）、低密度脂蛋白（low-density lipoprotein,LDL）和高密度脂蛋白（high density lipoprotein,HDL）;苏木素-伊红（Hematoxylin＆eosin,HE）染色光镜下观察各组大鼠肝脏和回肠组织病理学改变;透射电镜下观察回肠黏膜超微结构改变。反转录实时荧光定量多聚酶链式反应（reverse transcription real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR）和免疫组织化学染色检测肝脏和回肠组织IL-17、IL-4、IL-10及γ-干扰素（interferon-gamma,IFN-γ）m RNA及蛋白表达水平。运用16S r DNA q PCR法检测5组大鼠粪便标本中3种主要细菌数量。结果1.体重、肝湿重和肝指数比较:5组之间体重差异无统计学意义（P>0.05）;III、IV、V组肝湿重和肝指数较I、II组明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。2.肝功能和血脂检测:III组ALT较I、II组显著升高,III、V组AST较I、II组显著升高,IV、V组AST较III组显著降低,III、V组CHO较I、II、IV组显著升高,III组TG较其余4组显著升高,III、IV、V组LDL较I、II组显著升高,差异均有统计学意义（P0.05）。3.肝脏和回肠组织病理形态学:I、II组大鼠肝脏基本正常;III组大鼠肝脏可见弥漫性脂肪变,广泛气球样变,明显炎症细胞浸润,碎片状坏死和桥接坏死多见,局部有假小叶形成;IV、V组大鼠肝脏同样出现脂肪变,但气球样变少见,坏死和炎症细胞浸润减少。I、II组大鼠回肠黏膜绒毛细长、整齐且紧密,无炎性细胞浸润;III组大鼠回肠黏膜绒毛断裂、缺失,间隙增宽,上皮细胞脱落,可见较多炎性细胞浸润;IV、V组大鼠回肠黏膜绒毛较整齐、紧密,缺失、断裂罕见,炎性细胞浸润少见。4.回肠超微结构:电镜下,I、II组大鼠回肠黏膜上皮细胞表面微绒毛丰富、整齐且紧密,紧密连接（tight junction,TJ）较长,细胞器形态正常;III组回肠黏膜上皮细胞微绒毛和细胞器严重破坏,TJ变短甚至消失;IV、V组回肠黏膜上皮细胞表面微绒毛整齐、较紧密,TJ形态和细胞器结构较完整。5.肝脏和回肠组织RT-q PCR检测结果:III组肝脏和回肠的IL-17和IFN-γm RNA表达水平较其余4组显著升高（P<0.05）;IV组回肠IL-4 m RNA表达较III、V组显著升高（P<0.01）;III组肝脏IL-10 m RNA表达水平较其余4组显著降低（P<0.05）,I、II、IV组回肠IL-10m RNA表达较III、V组显著升高（P<0.05）。6.肝脏和回肠组织免疫组化结果:III组肝脏和回肠IL-17和IFN-γ的蛋白平均光密度值较其余4组显著升高（P<0.05）,III组肝脏和回肠IL-4和IL-10的蛋白平均光密度值较其余4组显著降低（P<0.01）。7.三种细菌数量结果:II组大肠杆菌数量较III、IV、V组显著降低（P<0.05）;III组双歧杆菌数量较II、IV、V组显著降低（P<0.05）;III、IV、V组乳酸杆菌数量较I、II组显著降低,IV、V组乳酸杆菌数量较III组显著升高,差异均有统计学意义（P<0.05）。8.细胞因子表达和炎症相关性分析:IL-17和IFN-γ与肝脏、回肠炎症损伤呈正相关,IL-4和IL-10与肝脏、回肠炎症损伤呈负相关。结论1.NAFLD中存在IL-17、IFN-γ、IL-4和IL-10等细胞因子表达差异,以及肠黏膜屏障功能障碍。2.牛磺酸可以改善NAFLD大鼠肝功能,降低血脂,减轻肝脏炎症及脂肪变性程度,以及减轻肠道炎症,修复受损肠黏膜的机械屏障和生物屏障。3.牛磺酸可能通过上调IL-10和IL-4的表达,下调IL-17和IFN-γ的表达来减轻肝脏和回肠炎症,以及通过修复肠道机械屏障和生物屏障来改善肠道屏障功能,从而起到防治NAFLD的作用。