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构建了番茄花药晚期基因与白喉毒素A链蛋白编码基因的重组质粒PLat52-DTA,并运用农杆菌介导的花头浸泡法和叶盘法分别转化拟南芥和烟草。以期利用Lat52启动子的时空特异性在目标时期和位置启动毒蛋白DTA基因的表达,为进一步研究花粉发育过程中营养细胞和生殖细胞的互作提供材料。 在花粉粒发育的二细胞阶段,营养细胞与生殖细胞的互作一直是植物生殖生物学研究的热点之一。本实验在重组质粒Lat52-DTA基础上进一步构建了两个表达载体PCB302-Lat52-DTA和PBI101-Lat52-DTA-GUS,以农杆菌介导的叶盘法转化烟草植株,组织培养继代四次后,获得未检测的PPT抗性转基因株38株,Kan抗性转基因株52株,目前已移入土培12天,进一步的PCR和Southern分析等验证工作正在进行中。还获得了花头浸泡法转化拟南芥植株后的F2代种子若干。对F2代的进一步筛选正在进行中。已经摸索出比较成熟的培养拟南芥的条件,目前培育的成株连座叶一般能达到8厘米或以上。同时,对目前所使用拟南芥的转化方法进行了综述,并对花头浸泡法进行了一定的探讨和摸索。 通过普通切片染色和电镜切片初步确定了拟南芥小孢子发育不同时期与花蕾发育的形态学特征间的联系(某些数据未显示),为后续的细胞学观察奠定了基础。