背景:胶质瘤是人类中枢神经系统最常见的原发性肿瘤,其特点是快速浸润性生长方式,使手术完全切除成为不可能。尽管在肿瘤诊断和治疗方面取得了进展,包括手术、放疗和化疗,但WHOⅡ级胶质瘤患者中位生存时间为5年,WHOⅢ级胶质瘤患者中位生存时间为2至3年,WHOⅣ级为14.6月。对胶质瘤细胞发生机制的研究对胶质瘤的治愈来说至关重要,研究发现S100A12蛋白及HAX-1蛋白在细胞内扮演着重要的作用,参与许多生命调节环节,目前,S100A12已经被证明是星形胶质细胞活化的标志物。HAX-1蛋白因为其具有广泛的生物活性而受到关注,其中包括如调节细胞迁移、抗细胞凋亡、和调节细胞内吞等这些生物学功能。其中,我们发现,其在不同类型肿瘤的机制研究中起到参与肿瘤细胞侵袭、转移以及与肿瘤细胞的发生、发展息息相关。但是,目前来说,蛋白S100A12和HAX-1蛋白在胶质瘤细胞中的调节机制研究较少,其作用机制尚未得到充分的解析。目的:1、S100钙结合蛋白A12（S100A12）作为S100蛋白家族成员之一,其在中性粒细胞中的大量表达,淋巴细胞和单核细胞低表达。S100蛋白家族参与调控许多器官恶性肿瘤病理过程中都有报道,如口咽部鳞状细胞癌、直肠癌等。然而,目前为止,S100A12在胶质瘤中的作用机制尚未得到解析。我们对81例胶质瘤组织中的S100A12进行了免疫组化研究,以确定S100A12在胶质瘤细胞中的表达,并评价S100A12在胶质瘤患者中的临床意义。2、由于HAX-1对下游信号通路转导中的作用的文章存在争议并且在胶质瘤中尚无报道,因此探究HAX-1基因对神经胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响及机制,以及评价其与患者临床预后的相关性具有创新性。其结果有望为胶质瘤的治疗打开新的篇章。方法:1.培养本研究中用到的各种胶质瘤细胞系;2.用实时荧光定量聚合酶链式反应来检测胶质瘤细胞中S100A12以及HAX-1基因的转录水平;3.通过使用免疫组化染色的方法来探究S100A12以及HAX-1蛋白的表达情况;4.通过使用western blot蛋白免疫印迹技术检测胶质瘤细胞以及正常脑组织中的S100A12以及HAX-1蛋白表达情况,以及检测构建S100A12以及HAX-1的基因沉默株之后,相关蛋白表达的变化情况;5.通过使用克隆形成实验来探究S100A12及HAX-1基因沉默前后细胞生长能力的变化。6.通过使用流式细胞检测技术测定此二种基因对胶质瘤细胞作用后生长周期以及细胞凋亡产生的变化情况。结果:研究发现,胶质瘤患者的肿瘤细胞内,S100A12的表达情况与患者的存活率直接相关,S100A12低表达患者的5年存活率超过50%,而S100A12的高表达患者的5年存活率不足10%,81名患者肿瘤细胞中肿瘤的大小与KPS值与患者的S100A12基因表达相关,S100A12高表达的患者中,IIIIV级的患者的数量显著升高。此外,通过检测S100A12在胶质瘤细胞中的表达情况,MTT结果显示,S100A12的表达程度与胶质瘤细胞的生长呈正相关。蛋白表达水平的western blot分析我们发现,S100A12可以影响胶质瘤细胞的凋亡。S100A12的沉默株中,细胞的凋亡数量显著低于未沉默株。Transwell实验结果表明,S100A12对胶质瘤细胞的侵袭和迁移都有显著的增强作用,其相较于S100A12的沉默株,增强大致约3倍。相似的结果也出现在HAX-1相关的实验中。WB及q PCR分析发现,HAX-1在胶质瘤细胞中过表达,且HAX-1在细胞中的表达与年龄、性别等其他因素无关。Transwell实验结果表明,HAX-1基因增加了胶质瘤细胞的侵袭和迁移能力,此外还能够影响胶质瘤细胞的克隆形成能力,HAX-1过表达的细胞中,细胞侵袭能力是HAX-1沉默细胞的2.6倍。同时,我们对患者的临床数据进行分析发现,HAX-1的表达是胶质瘤患者的独立预后因素。此外,我们还对HAX-1基因及S100A12基因在胶质瘤细胞中的相关性进行分析,我们发现HAX-1基因和S100A12基因在细胞中呈现正表达的关系。结论:综上所述,S100A12及HAX-1蛋白对胶质瘤细胞的生长增殖均有促进作用,并且是胶质瘤的独立预后因素。且有望成为胶质瘤诊断的标志物。