渔业经济在广西大农业经济中占有重要地位,凡纳滨对虾养殖业是渔业经济的支柱产业之一。选育优良品种、调控性别对凡纳滨对虾养殖业发展具有重要意义。通过对凡纳滨对虾精巢组织内生精上皮细胞的培养,可以进一步研究生精上皮内的精原干细胞,并由此开展对虾精子生成的分子学和细胞学、对虾的发育生物学及繁殖学等研究。与此同时,凡纳滨对虾精荚的低温保存研究,为进行精子筛选、人工授精等对虾品种选育研究工作提供实验基础,对凡纳滨对虾遗传多样性保护、遗传育种和生产具有重要意义。1.凡纳滨对虾精巢组织细胞的培养本实验是在无菌条件下,对凡纳滨对虾进行解剖,摘取精巢组织,机械剪碎处理组织后,筛网过滤的方法获得细胞,以添加了1mol/L HEPES缓冲液、20%胎牛血清、100IU/ml青-链霉素双抗溶液的M199为培养基,在28℃恒温、90%湿度的环境下,对凡纳滨对虾的精巢组织细胞进行原代培养,通过倒置显微镜进行贴壁情况观察,并对细胞HE染色进行形态学观察。在本实验中,在培养凡纳滨对虾精巢组织细胞24h后,可观察到细胞出现贴壁,一些细胞贴壁后即分化成为成纤维细胞和上皮样细胞,细胞在体外可存活7d。2.凡纳滨对虾精荚低温保存方法的建立本实验是在无菌条件下,将凡纳滨对虾的精荚采集到EP管中,加入由I型液态鼠尾胶原、2×1640浓缩培养液、胎牛血清和可溶性基底膜基质配制而成的培养层,封口后于4℃环境下保存。用伊红苯胺黑染色检测30d内精荚中精子存活率,用SPSS17.0软件统计数据。在本实验中,凡纳滨对虾精荚在低温保存30d内的精子平均成活率为52.14+8.04%。