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内源性的血管损坏或供血不足会引起组织缺血,进而导致愈伤失败、组织器官功能丧失。如何促进血管新生是临床研究领域一个非常重要的课题。利用外源的血管生成因子促进血管新生是改善缺血组织功能的有效手段。人碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)能有效促进成纤维细胞、血管内皮细胞和平滑肌细胞增殖,在体内能促进血管再生和损伤修复,因而现在被广泛用来进行治疗性血管新生研究。然而从目前临床研究的效果而言,bFGF的治疗效果并不理想,其中很重要的一个限制是给药途径,即目前bFGF的给药途径主要是通过灌注和注射。通过以上途径给药在治疗部位的药物积累低,从而需要采用多次、高剂量的方式给药。这种方式不仅治疗效果差,同时存在潜在安全隐患。因此,非常有必要改进传统的给药方法,即通过位点特异的方式进行。
基于此,我们拟采用靶向治疗的策略解决这个问题。所谓靶向治疗就是使药物直接作用于治疗靶标,提高治疗的针对性,从而增加治疗的效果/风险比。在本研究中,我们把广泛存在于损伤过程中的血浆凝集物(plasma clot)作为靶标与bFGF特异结合,从而达到限制扩散和维持药物浓度和时效的目的。血浆凝集物的主要成分是纤维蛋白(fibrin),它是一种组织精细的网络支架,能提供天然的生长因子结合位点。血浆凝集物也存在于其它缺血疾病中,如血栓和梗塞。为了使bFGF与纤维蛋白特异结合,我们把人纤溶酶原(plasminogen)分子中的Kringle1(K1)片段融合到bFGF中赋予bFGF特异的纤维蛋白结合能力,重组蛋白K1bFGF能特异地结合在创伤部位的纤维蛋白从而显著改善血管新生。为了把K1bFGF应用到其它没有天然血浆凝集物的病例,我们制备了一种可替代的纤维蛋白支架,它与天然血浆凝集物有相似的微观结构。这种支架能特异结合K1bFGF并将其维持在创伤部位;同时,外源的支架材料为细胞增殖和组织再生提供了三维空间和支持,从而显著提高血管再生。
此外,我们还尝试了另外一种支架材料,胶原。类似地,我们将两个特异的外源胶原结合区(collagen binding domain,CBD)融合到bFGF,重组蛋白CBD-bFGF能与胶原支架特异结合,从而增强血管新生。