NDV疫苗候选毒株的筛选及主要生物学特性研究

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  本研究对自1997年以来分离到的24株新城疫野毒株进行了复壮、基因分型,从中筛选出疫苗候选株,对其进行了主要生物学特性的研究,包括对MDT、ICPI、IVPI和LD50的测定,主要囊膜蛋白基因的测序分析和免疫原性的研究。   自行设计了一对新城疫病毒基因分型PCR扩增引物,通过RT-PCR方法,成功地扩增出了24株新城疫野毒株F基因3端375bp的核苷酸片段。利用基因分析软件DNASTAR5.07进行系统发育进化树的绘制,从而成功对该24株野毒株进行了基因分型。基因分型结果表明,24株新城疫野毒株中有20株基因Ⅶ型毒株,1株基因Ⅰ型毒株,1株基因Ⅱ型毒株,1株基因Ⅲ型毒株,1株基因Ⅵ型毒株,从而说明了近年来广东地区新城疫流行毒株主要是基因Ⅶ型毒株。疫苗候选毒株GM株为基因Ⅶ型毒株,JM株为基因Ⅱ型毒株。   综合考虑新城疫野毒株的HA效价、基因型、发病特征、宿主来源分离地点、分离时间等方面,从24株中筛选出了两株疫苗候选株GD/GM/03/Ch(简称GM株)和GD/JM/00/Do(简称JM株),进行致病性试验,并分析结果。   自行设计了6对引物分段对GM株和JM株病毒的囊膜蛋白基因M、F和HN基因进行了PCR扩增和克隆测序。GM株和JM株的总扩增长度分别为4897bp和4974bp,其中包含M蛋白的完整ORF、F基因全长和HN蛋白的完整ORF。   对其进行序列同源性分析,并对GM株和JM株进行了免疫原性的研究以及抗体消长规律研究试验和攻毒保护性试验。   综上所述:近年来广东地区新城疫主要流行毒株为基因Ⅶ型毒株;GM株和JM株作为流行代表毒株具有较好的免疫原性,具备作为疫苗株的潜力。
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