基于液相色谱、近红外光谱技术和化学计量学的三七和西洋参样品质量评价研究

来源 :安徽中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sticker2009
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
三七为五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根及根茎,西洋参为五加科植物西洋参Panax quinquefolium L.的干燥根,均为我国名贵中药材,一直以来其质量备受关注。文献报道,受不同产地、种植、加工方式和采收年限等多因素影响,药材的质量检测及评价引起了广泛的关注,市场调查表明,三七和西洋参药材的掺伪掺劣等以次充好现象层出不穷,为临床安全用药带来了一定的隐患。现代化学及药理活性研究表明,人参皂苷是三七和西洋参的主要药效成分,常被用于评价三七和西洋参药材的质量。基于中药药效活性源自多成分多靶点的认知,应采用多种技术,以多成分为指标对药材的质量进行评价。近年来,近红外光谱(near infrared spectroscopy,NIRS)技术因其无损样品、分析快速等优势广泛应用于中药材的定性定量分析,是对现有以液相技术为主的质量评价的一个有益补充。本研究以自采及市购三七样品、国产及进口西洋参样品为研究对象,采用超高效液相色谱技术(ultra performance liquid chromatography,UPLC)和NIRS技术,对三七和西洋参样品进行化学成分定性定量分析;应用化学计量学分析方法,考察三七和西洋参不同产地和年限样本、三七不同商品规格的质量差异,为三七和西洋参药材的质量评价研究提供实验数据。本论文的具体研究工作如下:1.对三七和西洋参相关文献进行了综述。分别对三七和西洋参药材相关的文献报道进行综述,包括化学成分研究、皂苷成分的分析方法,不同部位、等级规格、产地和不同年限及采收期的质量评价研究,为本文工作的开展提供参考。2.收集了大量样本。2016年10月自云南文山等11个县和广西等地采挖1-4年生三七植株(19批);在文山三七药材交易市场购买三七鲜品(6批)和个子货(13批)。2014年于吉林收集西洋参植株样品(19批),药材市场购买市售品(8批);2015年于成都荷花池市场购买市售品(38批);2016年于亳州康美药材市场购买市售品(84批)。3.建立了基于NIRS技术的三七样品识别模型。3.1建立了三七剪口、主根、筋条、须根、茎叶样本的NIR识别模型。采集三七样本的NIR图谱,采用多元散射校正(multiplicative scatter correction,MSC)、一阶导数(first derivative,1stD)、二阶导数(second derivative,2ndD)、Norris Derivative(N-D)和Savitzky-Golay(S-G)滤波平滑等预处理方法进行光谱预处理,使用判别分析法(discriminate analysis,DA),对三七剪口、主根、筋条、须根、茎叶样本进行识别。结果表明,NIR光谱经MSC+1stD+ND(5,5)预处理,在8000-4200 cm-1范围内,可建立三七剪口、主根、筋条、须根、茎叶的判别模型,且判别模型验证集的判正率达100%。3.2建立了三七主根掺茎叶样品(粉)的NIR识别模型。采用DA,对三七主根掺茎叶样品(粉)进行识别,NIR光谱经MSC+2ndD+ND(5,5)预处理,在8000-4500 cm-1范围内,校正集和验证集的判正率均为100%,可准确识别茎叶掺入量小于15%、20%-40%、50%以上者;采用偏最小二乘法(partial least squares method,PLS),建立茎叶掺入量预测模型,光谱经MSC+2ndD+SG(9,3)组合处理,校正集相关系数(R~2cal)、预测集相关系数(R~2pre)和交叉验证相关系数(R~2cv)分别为0.9972、0.9970和0.9948。4.三七植株不同部位化学成分的比较研究采用UPLC-飞行时间质谱(UPLC-quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC-Q-TOF/MS),对三七植株不同部位的化学成分进行定性比较研究,茎叶样品初步归属了21个化合物,主要为黄酮醇和原人参二醇型皂苷类成分;地下部分不同部位样品(剪口、主根、筋条和须根)初步归属了31个化合物,主要含有原人参二醇型和三醇型皂苷。采用UPLC对地下部分各样本进行了三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd 5个皂苷类成分的含量测定,研究结果显示,剪口、主根、筋条和须根的5种皂苷成分含量存在显著性差异,总皂苷含量按剪口(19.40%±2.9%)>主根(12.29%±2.45%)>筋条(10.88%±2.16%)>须根(7.20%±1.54%)顺序下降。主根样品的等级划分同5种皂苷类成分的含量高低无明显相关性。偏最小二乘判别分析(partial least squares discriminant analysis,PLS-DA)结果表明,人参皂苷Rd、Rg1和Rb1是区分剪口、根及须根部位的差异性成分;人参皂苷Rd、Rg1和Rb1含量之和在剪口、根及须根部位分别为16.56%±1.57%,10.27%±1.95%,5.80%±1.24%。不同年限的三七各部位样品所含皂苷含量高低趋势为4年≈3年>2年>1年,正交偏最小二乘判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)表明,人参皂苷Rg1是两年七和三年七的差异性成分;两年七和三年七人参皂苷Rg1的含量分别为3.53%±0.30%,4.70%±0.44%。不同产地样本的皂苷成分含量差异较大,剪口样品中5种皂苷成分含量以云南文山县(23.15%)、沾益县(22.68%)和弥勒市(22.22%)产较高;主根样品以云南泸西县(19.23%)、师宗县(17.34%)和广西百色(16.71%)产较高;筋条样品以广西百色(16.53%)和云南文山县(12.74%)产较高;须根样品以云南弥勒市(9.36%)和文山县(9.31%)产较高。5.构建了三七样品皂苷成分含量测定的NIR模型。采用PLS方法,构建了153批三七(剪口、主根和筋条)样品中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1和Rd总量的NIR预测模型,R~2cal、R~2pre和R~2cv分别为0.9734、0.9343和0.9593,校正均方差(root mean square error of calibration,RMSEC)为0.821,预测均方差(root mean square error of prediction,RMSEP)为0.972,交叉验证均方差(root mean square error of cross validation,RMSECV)为1.02。所建近红模型预测性能良好,能够快速准确地评价三七样品中的5个皂苷成分含量。6.建立了西洋参样品6种人参皂苷类成分含量的UPLC测定方法建立UPLC同时测定西洋参样品中6种皂苷-人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Ro、Rd含量的方法,对不同产地和不同生长年限的西洋参样品进行质量分析。结果显示,2-4年产西洋参样品的人参皂苷含量高低趋势为4年>3年>2年,人参皂苷Rb1和Rg1可作为区分不同年限西洋参样品的主要成分,2、3、4年样本人参皂苷Rb1、Rg1的总量分别1.00%±0.09%,1.49%±0.46%,1.55%±0.46%。OPLS-DA可用于区分吉林、加拿大和山东产的西洋参样品,人参皂苷Re、Rb1、Ro、Rd是产地判别分析的主要差异性成分,吉林、加拿大和山东样本上述4种皂苷成分总量分别为3.81%±0.28%,5.46%±0.64%,4.47%±0.60%。7.建立了基于NIR技术的西洋参样品质量评价及产地识别以水分、人参皂苷Rg1、Re、Rb1(简称药典指标成分)总量及人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Ro、Rc、Rd 6种人参皂苷(简称总皂苷)总量为参考值,结合NIR数据信息,运用PLS方法,建立西洋参样品中水分和人参皂苷的含量预测分析模型。结果表明,经MSC+导数+ND平滑组合预处理后,水分模型R~2cal、R~2pre和R~2cv分别为0.9780、0.9757、0.9572;RMSEC、RMSEP和RMSECV分别为0.287、0.248和0.401。药典指标成分和总皂苷总量模型R~2cal分别为0.9412和0.9627,R~2pre分别为0.9528和0.9386,R~2cv分别为0.8958和0.9347;RMSEC分别为0.208和0.188,RMSEP分别为0.147和0.198,RMSECV分别为0.389和0.248。所建各个近红外定量模型预测性能良好,可用于西洋参药材中水分和人参皂苷成分的含量测定。基于NIR全光谱信息,采用OPLS-DA分析法,建立西洋参不同产地和规格的辨识模型。OPLS-DA模型各参数R~2X(cum)、R~2Y(cum)、Q~2(cum)分别为1.000、0.866、0.713和0.999、0.885,0.791,可有效辨别不同规格和产地的西洋参样品。综上,本论文采用UPLC和NIR技术,结合多种化学计量学分析,对三七植株的剪口、主根、筋条、须根及茎叶部位进行化学成分定性定量比较研究,分析了生长年限及产地对三七质量的影响;对西洋参的药材及饮片进行质量研究,分析了产地对西洋参质量的影响;建立了三七和西洋参皂苷类成分含量的NIR预测模型,丰富了三七和西洋参的质量评价方法,为三七和西洋参的质量评价提供了实验数据。
其他文献
目的:为提升霍山石斛质量标准,促进安徽道地药材品质提升,选取42批霍山石斛、10批铁皮石斛、8批铜皮石斛饮片为研究对象,采用分析组合技术对霍山石斛的质量进行初步研究与分析,并与铁皮石斛和铜皮石斛进行比较,探寻霍山石斛的专属成分,为完善霍山石斛质量标准提供理论依据。方法:1.通过HPTLC法建立薄高效薄层指纹图谱,探究霍山石斛的专属性薄层信息,从而达到鉴别霍山石斛目的,并对铁皮石斛、铜皮石斛加以区分
目的:本文以栀子的临床常用饮片(生栀子、焦栀子、栀子炭)为研究对象,从药代动力学角度探讨栀子三种饮片经灌胃给药在正常大鼠和发热大鼠的药动学行为的差异,揭示栀子不同饮片在正常和发热大鼠体内直接作用物质群及变化规律,为阐明栀子饮片的炮制机理奠定基础。方法:(1)采用HPLC特征图谱方法,探讨生栀子、焦栀子和栀子炭三种饮片主要环烯醚萜类成分的变化规律,同时采用HPLC法同时测定栀子生、焦和炭饮片及提取物
1.目的寻找女性Wilson病伴生殖系统损害的中医证候分布特征;观察补肾化痰祛瘀方对Wilson病女性患者伴生殖系统损害的临床疗效;并通过动物实验进一步探讨补肾化痰祛瘀方对改善女性Wilson病伴生殖系统损害的作用机制。2.方法2.1证候调查对2017年1月至11月在安徽中医药大学第一附属医院(安徽省中医院)就诊的女性患者,完善相关检查后按就诊顺序筛选出肝豆状核变性(WD)组143例,伴生殖系统损
1目的:以四大主产区的丹参为研究对象,对丹参进行快速鉴别研究,为丹参的整体质量控制和评价方法提供科学依据。2方法:采用电化学指纹图谱技术、红外光谱技术以及显微红外技术鉴别丹参与南丹参两种药材,并对不同产地、不同部位的丹参药材进行鉴别和半定量研究。3结果:3.1研究丹参的电化学指纹图谱,确定实验最佳条件:温度为310 K、转速为400r/min、药材加入量为0.2000 g,并获得了不同产地、不同部
吡拉格雷钠是以奥扎格雷钠为先导物,通过化学方法筛选出的新一代血栓素合成酶抑制剂。临床显示可以减轻脑缺血/再灌注后的脑水肿,保护血脑屏障的完整性,在脑缺血再灌注模型上具有较好的保护作用。近年来,国内外对吡拉格雷钠的研究主要集中于体内外评价和临床应用方面,关于吡拉格雷钠杂质与有关物质研究的文献少有报道。本课题以吡拉格雷钠合成工艺路线为基础,开展从起始原料到中间体再到终产品的合成工艺全程中的杂质控制研究
当前,"社会性别主流化"(gendermain-streaming)日益受到关注,成为全球以人为中心的社会发展模式的重要组成部分,并已纳入联合国的性别发展指标体系。然而,从世界范围的社会发展实践来看,性别平等政策并未获得充分落实。受到传统观念影响以及现有法律政策不完善等制约,亟需对社会性别主流化进行建构,进一步倡导两性社会平等,使社会发展进程得到性别平等的保障。1.社会性别研究源起1.1社会
期刊
近年来,为了积极应对日益严重的环境问题和能源危机,可再生能源的开发和利用得到了迅猛发展。风能作为可再生能源的一种,具有清洁、无污染、可再生等诸多优点,受到了世界各国的广泛关注和重视,风力发电装机容量不断增加。作为目前风力发电系统中的主流机型,双馈电机(DFIG)在整个风电产业中占据极为重要的地位,因此高性能双馈电机控制算法的研发就显得尤为重要。本文以双馈电机的高性能控制为主要内容进行了深入研究,从
目的:研究亳芍不同时期不同组织部位内生真菌的种类、分布,分析并筛选出抗病原菌的优势菌属。进一步研究其次生代谢产物,以期得到具有结构新颖活性先导化合物。为道地药材亳芍资源进一步研究及质量控制奠定基础。方法:运用组织块分离法和分子生物学技术对亳芍不同时期不同织部位的内生真菌进行分离鉴定,对所分离得到的内生真菌进行生物学统计,分析其多样性和群落结构。采用十字交叉法筛选出抗植物病原真菌活性较好的优势菌株。
目的:研究不同生长地区凤丹根皮中的内生真菌种类和优势种属,筛选出抗病原真菌的优势菌种。进一步探讨如何使内生真菌发酵这一过程变得更加简便、省时,并对以上优势菌种化学多样性进行研究,以期寻找出新颖、高生物活性的天然先导物。研究重金属离子与内生真菌的相关性,为揭示凤丹药材道地性形成提供重要信息。方法:利用纯培法以及分子生物学技术对凤丹根皮中内生真菌进行分离鉴定,运用统计学方法分析凤丹根皮中内生真菌的多样