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流行病学调查显示,H6N2亚型禽流感病毒是2000年-2008年间在华南地区最常分离到的病毒之一,该亚型病毒在家养鸭与一些野鸟之间的重组经常发生。在加拿大H6N2亚型病毒对鸡不产生致病性,但是台湾所有分离到的H6N2亚型病毒均可对鸡产生低致病性,并且能与其他一些疾病相结合从而导致经济损失。 为了了解2008-2010年华南地区H6N2亚型低致病性禽流感病毒全基因组的遗传演化情况,本研究对此期间华南地区分离的10株H6N2亚型低致病性禽流感进行全基因组克隆、序列比对及遗传演化关系研究。结果表明:这些病毒各8个基因片段主要分布在ST339-like、HN573-like、ST2853-like、Netherlands-like等不同进化分支,遗传演化具有多样性,发生了不同基因型之间的多元重组。其中HA蛋白的第26位、27位、39位、182位、306位、498位、557位等7个N-糖基化位点在10个毒株中较为保守,PB2基因的627位均为Glu(E),具有典型的禽源病毒PB2基因的627位氨基酸的分子特征;M2蛋白发生了S31I的变异使得各毒株具有金刚烷胺耐药株的分子特征。 为了研究H5N1亚型高致病性禽流感病毒的复制酶基因(PB1、PB2和PA)和核蛋白复合体基因(PB1、PB2、PA和NP)与H6N2亚型低致病性禽流感病毒对应基因替换重组后对H6N2低致病性禽流感病毒复制的影响,本研究选择1株H6N2亚型低致病性禽流感病毒A/DK/GD/65/2008(H6N2)(简称DK65株)与1株H5N1亚型高致病性禽流感毒株A/DK/GD/212/2004(H5N1)(简称DK212株,对鸡具有高致病性)作为研究对象。利用反向遗传操作技术分别成功地拯救了2个重组病毒H5N1病毒DK212的PB1、PB2和PA与DK65的其他5个基因的重组病毒以及H5N1病毒DK212的PB1、PB2、PA和NP与DK65的其他4个基因的重组病毒。通过比较亲本病毒DK65与上述两株重组病毒对鸡胚的半数感染量(EID50)和平均死亡时间(MDT),结果显示H5N1亚型禽流感病毒PB1、PB2与PA基因和PB1、PB2、PA和NP基因增强了重组H6N2亚型禽流感病毒在鸡胚上的复制能力与致病力。因此,H5N1亚型高致病性禽流感病毒的复制酶基因或核蛋白复合体基因与H6亚型低致病性禽流感病毒的基因重组可以增强H6亚型禽流感病毒在鸡胚上的复制能力与致病力。