实验动物皮肤病原真菌分子生物学检测方法的建立及应用

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目的:大鼠、小鼠、豚鼠、家兔等作为实验动物,已广泛应用于科研、教学和生产实践中。三种致病性皮肤真菌:犬小孢子菌( Microsporum canis )、石膏样小孢子菌(Microsprum gypseum)、须毛癣菌( Trichonohyton mentagrophytes),是所有实验动物应排除的病原菌,不论是从动物皮肤病灶处或从非病灶处分离到这三种菌,均视为异常。因为非病灶处的真菌很可能随后引起实验动物的皮肤病,并有可能造成饲养和实验人员的感染。目前该病的实验室诊断主要依赖于形态学观察(直接镜检及真菌培养),但所需时间长,且不易鉴定到种的水平,尤其需要较长的工作经验,因而不能满足实验动物快速、准确检测的需要。近年来,分子生物学方法开始应用于真菌学研究方面,如RFLP、分子杂交、DNA序列分析等,特别是任意引物聚合酶链式反应(AP-PCR),有力地促进了皮肤病原真菌检测的发展。本研究将皮肤病原真菌通用引物PCR与AP-PCR技术相结合,应用于实验动物皮肤病原真菌的检测,使真菌的表型鉴定转向基因型鉴定,以达到快速准确检测实验动物皮肤病原真菌的目的。方法: 1标准菌株的DNA提取及PCR扩增:取标准菌株犬小孢子菌、石膏样小孢子菌、须毛癣菌传种至沙氏斜面固体培养基,27℃培养7天。无菌条件下各取少量以上三种培
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