论文部分内容阅读
第一部分BAP1蛋白表达与肺腺癌临床预后的关联分析目的：研究BAP1 (Breast cancer 1-associated protein 1)在人肺腺癌与正常肺组织中的表达差异；研究人肺腺癌组织中BAP1蛋白的表达,及其与各临床病理学参数、临床预后之间的关联。材料与方法：收集我院112例肺腺癌(lung carcinoma, LAC)病例的临床资料,并进行随访；收集同期我院101例肺部良性疾病的标本。利用免疫组织化学法(Immunohistochemistry, IHC),检测BAP1蛋白表达情况,利用进行分层分析研究其间的关联,通过生存分析评价BAP1作为肺腺癌预后指标的可行性。结果：BAP1在肺腺癌组织中呈低表达,在正常肺组织中表达水平较高,差异有统计学意义Cp<0.001)。 BAP1表达与肺腺癌患者的年龄、性别、大体类型、肿瘤最大径、组织分化程度和组织学亚型等参数无明显关联。BAP1蛋白在早期肺腺癌患者(I/II期)中的表达较晚期的(III期)高(p=0.007),在无胸膜侵犯的肺腺癌中表达较有胸膜侵犯的病例高(p=0.004),差异均具有显著性。另外,BAP1的表达高低在T分期早期(T1-2)和晚期(T3-4)、N分期早期(No-1)和晚期(N2-3)、术后有无复发或转移等不同情况间也具有统计学差异。生存分析显示BAP1蛋白高表达者的无病生存率和总生存率均优于低表达者,但多因素分析不支持BAP1是肺腺癌患者的独立预后因素。结论：BAP1高表达更多见于T分期、N分期、临床分期早期的患者,更多见于无胸膜侵犯的病例,提示BAP1可能影响肺腺癌的侵袭和转移能力。该蛋白高表达提示肺腺癌患者预后较好,但作为独立预后指标,证据尚不足。第二部分BAP1调控细胞增殖与迁移的机制初探目的：体外观察BAP1对肺腺癌细胞周期、增殖、侵袭和迁移的调控作用,初步探究其影响肿瘤细胞功能的机制,为肺腺癌的侵袭、转移治疗和靶向药物研发提供理想的靶点。材料与方法：筛选BAP1本底表达水平不同的肺腺癌细胞株,分别转染siBAP1和带有该基因的质粒载体,改变BAP1蛋白表达水平。利用流式细胞术(flow cytometry, FCM),观察BAP1表达不同时细胞周期、凋亡和坏死的变化。体外增殖实验检测细胞增殖能力的改变。利用划痕实验和Transwell小室观察肿瘤细胞迁移能力的变化。同期利用Western Blot检测BAP1蛋白及周期相关蛋白、侵袭相关标志物表达变化的趋势。结果：BAP1过表达能够促进肺腺癌细胞周期,诱导细胞凋亡和坏死,但对细胞增殖能力无明显影响,反之亦然。BAP1蛋白表达量的变化趋势与P27相反,而与周期蛋白CyclinB1相同。在体外,BAP1过表达能抑制肺腺癌细胞的侵袭与迁移能力,而干扰BAP1的表达能使细胞侵袭与迁移能力上调。其表达变化趋势与Vimentin和MMP-2 (matrix metalloproteinase-2,基质金属蛋白酶2)相反,而与E-Cadherin的表达变化趋势一致。结论：BAP1能够加速肺腺癌细胞周期,促进细胞凋亡和坏死。能够抑制肺腺癌细胞的侵袭与迁移能力,该作用可能通过EMT途径进行调控。从细胞生物学层面进一步论证了BAP1在肺腺癌中是一抑癌因子。而它发挥作用的具体通路及上游蛋白尚有待深入研究。