鸡传染性鼻炎（infectious coryza,IC）是由副鸡禽杆菌（Avibacterium paragallinarum,Apg）引起的一种急性呼吸道疾病,最明显的特征为面部肿胀,鼻腔有分泌物流出和结膜炎,同时可导致生长迟缓以及产蛋量下降。近年来,接种了灭活疫苗的鸡群中,仍然频繁暴发IC,对养禽业造成了巨大的损失。疫苗免疫是预防IC的主要策略,血凝抑制（Hemagglutination inhibition test,HI）抗体效价是评价疫苗免疫效果的重要指标,但是目前还缺乏商品化的凝集抗原。本研究一方面研制了 Apg血凝抑制试验抗原,另一方面用制备的凝集抗原评价了灭活疫苗对当前流行菌株的免疫保护效果。1.Apg血凝抑制试验抗原的制备本研究首先通过Apg标准菌株221（A型）、Spross（B型）、H-18（C型）分别优化并建立了针对A、B、C型Apg血凝抑制试验抗原制备方法。血清A型菌株不需要特殊处理即有血凝性,透明质酸酶处理前后血凝价没有差异。B型菌株最佳处理条件为5 U/mL透明质酸酶37℃条件下反应2 h。C型菌株最佳反应条件为添加10 U/mL透明质酸酶37℃条件下反应2 h。进一步在A、B、C三个血清型的流行菌株中筛选并获得血凝价高,稳定性好的菌株,其中分离株2019/JS15（A型）HA效价为28,2019/JS37（B型）HA效价为27,2020/JS80（C型）HA效价为27。同时制备了冻干Apg血凝抑制试验抗原,血清A型Apg冻干血凝抑制试验抗原在-20℃条件下HA效价可稳定保持4个月以上,血清B、C型Apg冻干血凝抑制试验抗原保存条件仍需进一步探索。2.灭活疫苗对流行菌株的免疫保护效果评价本研究通过动物试验的方法,旨在验证IC三价灭活疫苗（印度尼西亚美迪安有限公司）对目前Apg流行菌株的免疫保护效果。将100只试验鸡分为一免组（A1、B1、C1）、二免组（A2、B2、C2）、攻毒对照组（A3、B3、C3）和空白对照组（D）。二免组于60日龄时进行第一次免疫,110日龄时进行第二次免疫。一免组仅在110日龄时进行免疫。采用上一章制备的凝集抗原通过HI试验检测疫苗免疫后的抗体效价。130日龄时,通过滴鼻接种的方式,分别使用2019/HB65（A型）对A1、A2、A3组进行攻毒,使用2019/HB68（B型）对B1、B2、B3组进行攻毒,使用2020/JS80（C型）对C1、C2、C3组进行攻毒,攻毒剂量均为每只5 × 106 CFU/0.2 mL。A型抗体效价高于B型和C型,二免后第3周HI水平平均值最高可达到13.1 log2,仅一次免疫检测不到B型抗体,而二次免疫第3周的抗体检效价平均值为6.1 log2。C型抗体二免后第3周HI水平均值最高可达到10.2log2。攻毒2020/JS80（C型）的C3组试验鸡发病情况最为严重。所有二免组的临床症状评分均低于一免组,并显著低于攻毒对照组。尤其是2020/JS80（C型）攻毒后,二免组没有任何临床症状。一免组和二免组的试验鸡攻毒后产蛋率略高于攻毒对照组且与空白组差异不显著。攻毒组A3、C3组的试验鸡产蛋率显著下降,但所有免疫组的试验鸡产蛋率无显著性变化。疫苗一免和二免后均能降低攻毒后的排菌量,尤其是二免组。眶下窦拭子重新分离Apg结果显示,攻毒后第7d对照组全部重分离到细菌。除攻毒C型的二免组没有分离到细菌,达到完全保护,其他各免疫都能够重分离到细菌（分离率≥80%）。攻毒后第14 d,所有组重分离率降低,除C组以外,各组之间无差异。综上,本研究制备了效价高稳定性好的凝集抗原,评价了灭活疫苗对分离株的免疫保护效果。免疫后二免组的HI抗体水平显著高于一免组。流行株攻毒后,免疫两次灭活疫苗保护效果优于免疫一次,能够显著降低临床症状、剖检病变和排菌量,尤其是C型分离株攻毒后能够达到完全保护。虽然疫苗免疫组仍有发病,但是体重和产蛋率维持不变。