油棕花粉萌发及相关基因表达验证研究

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花粉是植物遗传信息的重要载体,具有丰富的遗传多样性,是种质资源保存、交换及杂交育种的重要材料。自然条件下,油棕花粉寿命非常短,不利于自然授粉,也给人工控制授粉以及杂交育种工作带来不便。因此,开展油棕花粉的收集保存与利用研究具有重要意义。本文研究了油棕花粉收集、保存、活力检测以及人工授粉的技术方法,并对油棕花粉萌发相关基因进行了表达验证。以油棕种质资源圃的Pisifera、Dura和Tenera三个类型的油棕新鲜花粉为试材,研究了其花粉萌发方法,包括最适培养基、最适培养时间和最适培养温度等。本研究采用花粉离体培养基培养法,测定了几种油棕花粉在不同培养基组分、不同温度以及不同培养时间下的萌发率和花粉管长度的变化。结果表明,油棕花粉离体培养的最适温度为31摄氏度,培养温度过高或过低都会抑制油棕花粉的萌发和花粉管生长;而油棕花粉最佳培养时间为3小时。对Dura和Pisifera两种油棕花粉而言,最适合的培养基为0.01g/mL蔗糖+0.05%MS,在上述培养条件下,花粉萌发率可达93%以上。本研究以三个类型(Dura、Tenera、Pisifera)的油棕花粉为材料,选择稳定性较好的“看家”基因Actin作为内参基因,采用Real time-PCR方法分析了 4个油棕花粉萌发相关基因在花粉萌发前后的变化趋势和表达量变化。结果表明,与花粉萌发之前相比,OP_Pollen-l和OP_Pollen-4两个基因在3种花粉萌发后均为上调表达,OP__Pollen-3基因均为下调表达,而OP_Pollen-2基因的表达量在花粉萌发前后没有显著差异;上述4个花粉萌发相关基因在3种不同类型的油棕花粉萌发前后的表达模式有所不同,表明3种不同类型的油棕花粉间可能存在基因型差异。本研究重点探讨了油棕花粉萌发的技术方法,并对花粉萌发相关基因进行了表达验证。相关研究结果对于后续油棕花粉萌发机理研究以及花粉种质资源鉴定等具有一定的参考价值。
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