目的研究不同浓度乳铁蛋白(Lactoferrin LF)对原代大鼠成骨细胞IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5m RNA及蛋白表达的影响,力图为探讨乳铁蛋白影响骨代谢的分子机制提供参照。方法用混合酶消化法分离大鼠颅骨成骨细胞,进行原代培养。并用碱性磷酸酶和I型胶原免疫组化染色鉴定。采用荧光定量PCR技术及western blotting技术研究分析IGFBP-3、IGFBP-4、IGFBP-5的m RNA及蛋白表达。结果乳铁蛋白干预组(0.1ug/ml、1ug/ml、10ug/ml、100ug/ml、1000ug/ml))与对照组相(0ug/ml)比较,干预1天、3天后主要对IGFBP-3的m RNA的表达起抑制作用(P<0.01),第5天及第7天低浓度组(0.1ug/ml、1ug/ml、10ug/ml、100ug/ml)抑制,1000ug/ml组主要起促进作用(P<0.01)。1000ug/ml组与对照组相比较,乳铁蛋白干预原代大鼠成骨细胞1、3、5、7天对IGFBP-3蛋白的调控主要起抑制作用(P<0.01),而低浓度组与对照组相比较分别在第1天及第5天对IGFBP-3蛋白的调控起到了明显的促进作用(P<0.01),第7天有抑制趋势,但是未超过两倍。乳铁蛋白干预组与对照组相比较对IGFBP-4m RNA的表达有持续抑制作用(P<0.01),而在蛋白水平,未检测到。乳铁蛋白干预组与对照组比较,IGFBP-5m RNA的影响主要是抑制作用(P<0.01),0.1ug/ml、1ug/ml组与对照组比较第3及第7天有促进作用,但是未超过两倍。乳铁蛋白干预组相较于对照组第1天及第5天对IGFBP-5的蛋白主要起促进作用(P<0.01),1000ug/ml组在第5天虽然有抑制趋势未超过2倍,第3天及第7天未见明显变化(P>0.05)。结论(1)使用混合酶消化法可获得数量较多纯度较高的原代大鼠成骨细胞。(2)乳铁蛋白影响原代大鼠成骨细胞IGFBP-3,IGFBP-4,IGFBP-5m RNA和蛋白的表达。其中,在RNA和蛋白两个水平调控IGFBP-3及IGFBP-5,而在m RNA水平上对IGFBP-3及IGFBP-5的调控是不稳定的,在蛋白水平上的调控主要表现为促进作用。(3)乳铁蛋白抑制IGFBP-4m RNA的表达,呈浓度依赖性,浓度越高抑制作用越强。蛋白层面,IGFBP-4可能被PAPP-A(妊娠蛋白相关水解酶)水解。