【摘 要】
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近年来的临床数据表明,稳定期运动康复可显著提高冠心病患者的长期预后水平。本论文以血浆样本为分析对象,运用不同的提取方法提取脂类代谢物,并对分析检测条件进行优化,建立脂质组学的高通量分析方法,研究运动康复治疗对冠心病患者脂代谢特征的影响。主要研究内容如下:一、血浆中脂类代谢物提取方法和分析检测方法的建立。采用甲基叔丁基醚法和氯仿法提取脂类代谢物,并对分析检测的液相色谱条件和质谱参数进行优化。根据脂类
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近年来的临床数据表明,稳定期运动康复可显著提高冠心病患者的长期预后水平。本论文以血浆样本为分析对象,运用不同的提取方法提取脂类代谢物,并对分析检测条件进行优化,建立脂质组学的高通量分析方法,研究运动康复治疗对冠心病患者脂代谢特征的影响。主要研究内容如下:一、血浆中脂类代谢物提取方法和分析检测方法的建立。采用甲基叔丁基醚法和氯仿法提取脂类代谢物,并对分析检测的液相色谱条件和质谱参数进行优化。根据脂类代谢物的分子式规律,预测脂类代谢物可能的MS信息。通过与预测脂类代谢物的MS信息和人类代谢组学数据库中的MS信息匹配获得的有效质谱特征数量、脂类代谢物定性分析的响应强度及稳定性(RSD≤30%)筛选最佳的提取方法,发现采用Folch法(提取溶剂:CHCl3:Me OH:H2O(8:4:3,v/v/v),复溶溶剂:CHCl3:Me OH(2:1,v/v))提取脂类代谢物,获得的有效质谱特征数量较多,代谢物的响应强度和稳定性较好。通过对液相色谱和质谱参数的优化,发现流动相中加入甲酸铵可以改善色谱峰的峰形,提高质谱的响应强度;质谱参数对不同类别脂类代谢物的检测影响差异较大。二、冠心病患者血浆中脂类代谢物的定性分析。采用超高效液相色谱-高分辨质谱技术对血浆中的脂类代谢物进行检测。基于脂类代谢物的质谱特征,运用整合定性过滤策略(诊断碎片离子过滤、氮规则过滤和中性丢失)过滤干扰质谱,并结合标准品、文献或数据库的信息及脂类代谢物的色谱流出规律进行定性分析。在冠心病患者与健康人血浆中定性出308个血浆脂类代谢物,在冠心病患者运动康复前后的血浆中定性出257个脂类代谢物。三、冠心病患者运动康复前、后的脂代谢特征研究。基于内标法半定量分析的结果,运用主成分分析和偏最小二乘判别分析建立冠心病患者运动康复前和运动康复后的判别模型,并将T检验的结果与变量重要投影相结合筛选冠心病患者运动康复前和运动康复后的脂代谢特征。在2组患者中筛选出30个差异代谢物,并对这些差异代谢物进行代谢通路分析,发现花生四烯酸代谢、甘油磷脂代谢和鞘脂代谢对冠心病运动康复的影响较大。
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