【摘 要】
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目的:皮肤是人体最外层也是最重要的保护器官,其独特的结构形成了人体对抗外界抗原的第一道屏障。而表皮位于皮肤最外层,角质形成细胞是构成表皮的主要细胞成分,其易受多种外源性和内源性刺激导致的损伤。角质形成细胞损伤分泌炎症因子参与皮肤感染,接触性皮炎,银屑病等炎症性皮肤病的发病。石榴提取物中的活性成分具有抗炎症效应,其抗炎症作用表现在通过抑制NF-κB/MAPKs等信号通路的激活,下调促炎因子的表达,从
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目的:皮肤是人体最外层也是最重要的保护器官,其独特的结构形成了人体对抗外界抗原的第一道屏障。而表皮位于皮肤最外层,角质形成细胞是构成表皮的主要细胞成分,其易受多种外源性和内源性刺激导致的损伤。角质形成细胞损伤分泌炎症因子参与皮肤感染,接触性皮炎,银屑病等炎症性皮肤病的发病。石榴提取物中的活性成分具有抗炎症效应,其抗炎症作用表现在通过抑制NF-κB/MAPKs等信号通路的激活,下调促炎因子的表达,从而减轻皮肤炎症。本课题前期研究成果证明石榴提取物及其多酚类单体能够抑制poly（I:C）诱导的HEKa细胞NLRP3炎症小体启动和激活并且抑制HEKa细胞分泌IL-1β,具有抗炎作用。银屑病是一种慢性、复发性、炎症性皮肤病,其主要特征是角质形成细胞的异常增殖和过度分化,角质形成细胞等分泌IL-1β、IL-17A、TNF-α、IL-6等系列炎症因子在银屑病的发病过程中起重要作用,且被作为治疗靶点广泛应用。因此我们建立小鼠银屑病样皮肤炎症模型,研究外涂石榴提取物对抑制小鼠银屑病样皮肤炎症的保护效果。研究方法:1.研究对象:6-8周龄BALB/c雄性小鼠随机分为6组（n=4）,分别为:空白对照组（Blank）、空白基质组（PEG）、模型组（IMQ）、石榴提取物高剂量组[PE（10%）,即石榴提取物浓度为10%（w/w）]和石榴提取物低剂量组[PE（5%）,即石榴提取物浓度为5%（w/w）],以及阳性对照组（0.1%HC,即0.1%氢化可的松乳膏）;所有小鼠剃除背部毛发,形成2x3cm~2大小裸露区域。所有处理组小鼠给予5%的IMQ乳膏62.5mg/只/天,PEG组小鼠、治疗组小鼠和阳性对照组小鼠于5%IMQ乳膏处理后1小时分别给予PEG、10%PE、5%PE和0.1%氢化可的松乳膏0.1g/d,持续7天。拍摄皮损部位照片。PASI评分评估小鼠皮损严重程度。2.苏木精-伊红（Hematoxylin and eosin staining,HE）染色:标准方法制作HE染色切片,观察各组小鼠的组织病理学表现。3.实时定量聚合酶链反应（Realtime Quantitative polymerase chain reaction,Realtime-PCR）:在各组小鼠模型中检测银屑病及炎症相关细胞因子IL-1β、IL-17A、IL-6以及COX-2的m RNA表达水平,比较上述细胞因子在各组小鼠皮损中的表达差异。4.免疫组化染色（IHC）:在各组小鼠模型中,检测IL-1β、IL-17A、TNF-α、IL-6和COX-2蛋白表达水平,比较它们在各组小鼠皮损中的表达差异。5.血清MPO活性检测:在各组小鼠模型中检测血清髓过氧化物酶（MPO）活性,通过吸光度比较各组小鼠血清中MPO活性差异。结果:1.小鼠皮损临床表现和PASI评分:模型组（IMQ）小鼠背部皮肤出现浸润性红斑、明显的增厚和鳞屑。治疗组小鼠呈淡红斑,未见明显的斑块和增厚,且PASI临床评分具有统计学意义（P＜0.05）。2.组织病理学:模型组（IMQ）小鼠皮损中均出现表皮增厚和炎症细胞浸润。治疗组中,石榴提取物明显抑制表皮增厚,炎症细胞浸润减少,差异具有显著性（P＜0.001）。3.银屑病及炎症相关细胞因子:与模型组（IMQ）相比,治疗组小鼠皮损中IL-1β（P＜0.0001）、IL-17A（P＜0.0001）、IL-6（P＜0.01）以及COX-2（P＜0.01）的m RNA水平明显下调。4.免疫组化染色:在治疗组小鼠皮损中,IL-1β、IL-17A、TNF-α、IL-6以及COX-2蛋白表达水平均明显低于模型组（IMQ）小鼠（P＜0.0001或P＜0.001）,这与PCR结果一致。COX-2蛋白表达下调在低剂量组更为显著（P＜0.001）,但在IL-1β、IL-17A、IL-6、以及TNF-α表达未表现出明显差异。5.血清MPO活性检测:各组间血清MPO活性水平差异无统计学意义。结论:外涂石榴提取物对银屑病样皮炎小鼠模型有抗炎作用,其抑制咪喹莫特诱导的IL-1β、IL-6、IL-17A、TNF-α和COX-2的表达。
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