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副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis, HPS）是猪的革拉斯氏病（Glasser’s disease）的病原体，猪上呼吸道的一种共栖菌，它可在特定条件下侵入机体而引起以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为特征的全身性疾病，该病已经成为影响世界养猪业的最重要的细菌性疾病之一，给养猪业造成了重大损失。目前HPS已鉴定出15个血清型，但仍有大量的分离菌株无法定为任一血清型，同时各血清型之间缺乏有效的交叉保护，这都制约了副猪嗜血杆菌病的有效防控及其疫苗的发展。本研究对安徽地区HPS分离株进行KRG血清型和ERIC-PCR、PCR-RFLP基因型分析，同时在预测HPS TbpA蛋白抗原表位的基础上，将tbpA分段克隆、表达与鉴定，研究表达蛋白的免疫功能。本研究的主要目的是：(1)探讨安徽地区HPS的血清学和分子流行病学特点，为有效防控Glasser’s disease提供科学依据；(2)探讨TbpA蛋白在HPS免疫过程中的作用，为寻找制备高效广谱HPS新疫苗的途径提供理论依据。实验一、HPS安徽分离株KRG血清型及ERIC-PCR、PCR-RFLP基因型多态性研究自安徽省12个地区（或猪场）的发病猪（高热、呼吸困难）分离鉴定了18株HPS，采用KRG、ERIC-PCR、PCR-RFLP对其进行血清型和基因型分析。结果显示，18株HPS中有10株可以确定血清型，其中以血清型4型最为流行，占27.78%（5/18），其次为14型和13型分别占16.67%（3/18）和11.11%（2/18），此外尚有44.4%（8/18）的菌株不能进行定型。ERIC-PCR将18株HPS分为11个基因型，其中IV为优势基因型，占27.78%（5/18），其次是II基因型和I基因型，分别占16.67%（3/18）和11.11%（2/18）；PCR-RFLP将18株HPS分为6个基因型，其中优势基因型为DBP、BAE和BBB，分别占44.44%（8/18）、22.22%（4/18）和16.67%（3/18）；不能进行血清学分型的菌株均得到有效的基因分型。结果表明，HPS在安徽地区猪群中普遍存在，血清型、基因型均呈多态性分布，HPS的KRG血清型、ERIC-PCR基因型、PCR-RFLP基因型三者之间均无明显的相关性，而ERIC-PCR基因型与同一血清型菌株的来源相关，更能反映菌株的亲缘关系，从分子水平上揭示不同菌株的遗传距离，尤其是应用于病原在猪场的场内及场间的流行情况研究。实验二、HPS tbpA基因的克隆、表达及其免疫保护作用的研究参照GenBank上登陆的HPS SH0165株tbpA基因序列，设计一对特异性引物，采用PCR方法扩增HPS(LJ3株)的tbpA基因，并预测其信号肽序列及主要的抗原表位，以不破坏其优势抗原表位的原则，将tbpA基因分为三段，分别设计引物，经PCR扩增后克隆到pET-32a（+）表达载体中，成功构建了重组表达载体pET-32a(+)-tbpA1、pET-32a(+)-tbpA2和pET-32a(+)-tbpA3，转化BL21后进行诱导表达，经SDS-PAGE电泳可见大小分别为62kD、54kD、44kD的目的蛋白。三段重组蛋白经免疫印记检测后显示其均具有免疫反应性，能与兔抗HPS（LJ3株）高免血清发生特异性反应。将三段重组蛋白及HPS（LJ3株）甲醛灭活菌体分别免疫小鼠后，用同源菌株对菌体免疫组、三个重组蛋白免疫组及对照组小鼠腹腔攻毒，菌体免疫组及TbpA1能分别提供40%及20%的免疫保护率，而其他蛋白免疫组及对照组全部死亡。抗体杀菌试验结果同样表明，TbpA1蛋白的抗体具有杀菌作用。实验结果表明重组的TbpA1蛋白具有抗感染保护作用。