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目的本课题通过体内外动物、细胞实验,研究线粒体ROS-NLRP3信号通路在肝纤维化过程中的作用,探讨柴胡皂苷d（SSd）通过ERβ雌激素受体途径抑制ROS-NLRP3信号通路活化,从而发挥抗肝纤维化作用的机制,为临床治疗肝纤维化提供新的理论依据和实验依据。方法1.观察NLRP3炎性体在肝纤维化过程中的表达通过BDL大鼠肝纤维化模型、CCL4诱导肝纤维化小鼠模型、人肝星状细胞活化模型的建立,观察动物模型中血清肝功能、肝组织病理学、免疫组化α-SMA、TGF-β1表达变化;观察人肝星状细胞:CCK8法增殖实验、MDA试剂盒检测脂质过氧化水平、Western Blot法检测α-SMA的活化,对模型进行验证后,Western Blot、RT-PCR法检测NLRP3炎性体在纤维化模型中的表达。2.线粒体来源ROS与肝纤维化NLRP3过表达的关系研究及柴胡皂苷d（SSd）对线粒体ROS-NLRP3信号通路的调控作用（1）动物实验:采用CCL4诱导小鼠肝纤维化模型,将C57BL/6-WT型雄性小鼠随机分为对照组、CCL4模型组、Mito TEMPOL+CCL4/SSd+CCL4组,6周后处死小鼠。（2）细胞实验:将HSC-LX2分为对照组、H2O2模型组、Mito TEMPOL+H2O2/SSd+H2O2组,按H2O2 200u 4h作用HSC-LX2细胞制作活化模型;Mito TEMPOL、SSd均作用24h后同模型组处理。（3）检测指标:线粒体功能检测:荧光检测线粒体膜电位JC-1、Mito Sox Red线粒体超氧化物阴离子表达,化学发光法检测ATP水平;Western Blot、RT-PCR法检测NLRP3炎性体、IL-1β、IL-18表达;此外:动物标本留取血液和肝组织,检测血清肝功能,肝脏病理学变化,免疫组化观察组织α-SMA、TGF-β1表达;细胞标本行MDA试剂盒检测脂质过氧化水平。3.SSd抑制ROS-NLRP3信号通路抗肝纤维化的雌激素受体途径研究采用CCL4诱导αERKO、βERKO基因敲除小鼠肝纤维化模型、HSC-LX2细胞经过雌激素受体α阻断剂（MPP）、雌激素受体β阻断剂（THC）处理后由H2O2诱导细胞活化模型,探讨SSd抗纤维化的雌激素受体途径。（1）动物实验:C57BL/6-WTαERKO、βERKO基因敲除雌性小鼠随机分为对照组、CCL4模型组、SSd+CCL4组;造模方法同前,6周后处死小鼠。（2）细胞实验:将人肝星状细胞经THC、MPP预处理30分钟,分别分为对照组、H2O2模型组、SSd+H2O2组,造模方法同前。（3）检测指标:线粒体功能检测:荧光检测线粒体膜电位JC-1、Mito Sox Red线粒体超氧化物阴离子表达,化学发光法检测ATP水平;Western Blot、RT-PCR法检测NLRP3炎性体、IL-1β、IL-18表达;Western Blot、RT-PCR法检测α-SMA、TIMP-1、MMP-2、Vimentin、Ecadherin等纤维化相关指标变化;此外:动物标本留取血液和肝组织,检测血清肝功能,肝脏病理变化,免疫组化观察组织α-SMA、TGF-β1表达,细胞标本行CCK8细胞活力检测、MDA试剂盒脂质过氧化水平检测。结果1.BDL大鼠肝纤维化模型、CCL4诱导小鼠肝纤维化模型、人肝星状活化模型中NLRP3炎性体激活。（1）动物模型:与对照组比较,血清学AST、ALT明显升高,病理学胶原沉积明显,免疫组化示α-SMA、TGF-β1明显表达,肝组织NLRP3炎性体表达显著增加（P＜0.05、P＜0.01）.（3）HSC-LX2活化模型:H2O2 200u M使HSC-LX2细胞活力增强,MDA水平升高,α-SMA蛋白表达上调,NLRP3炎性体表达增加（P＜0.01）。2.线粒体ROS是激活NLRP3炎性体的关键信号,SSd对线粒体ROS-NLRP3信号通路发挥负调控作用。（1）动物实验结果:与对照组相比,Mito TEMPOL处理组、SSd处理组血清AST、ALT降低（P＜0.01）、病理染色胶原纤维沉积减轻,免疫组化α-SMA、TGF-β1表达减少;JC-1红/绿荧光值、ATP水平上调（P＜0.05、P＜0.01）,Mito SOX Red荧光表达下降（P＜0.01）,NLRP3炎性体表达下调（P＜0.01）。（2）细胞实验结果:与对照组相比,Mito TEMPOL干预降低活化的HSC-LX2细胞脂质过氧化水平,保持JC-1、ATP于正常状态,降低Mito SOX Red荧光表达（P＜0.01）,下调NLRP3炎性体表达（P＜0.01）。SSd干预组降低活化的HSC-LX2细胞的增殖及脂质过氧化水平,降低线粒体膜电位JC-1及Mito SOX Red荧光表达（P＜0.01）,下调NLRP3炎性体表达（P＜0.01）。3.SSd的ERβ途径抗纤维化机制（1）动物实验结果:SSd干预的WT及αERKO组线粒体功能正常,与模型组相比,JC-1红/绿荧光值、ATP水平上升（P＜0.05、P＜0.01）,Mito SOX Red荧光表达下降（P＜0.01）,NLRP3炎性体表达下降（P＜0.01）,血清AST、ALT降低（P＜0.01）、病理染色胶原纤维沉积减轻,免疫组化α-SMA、TGF-β1表达减少;α-SMA、TIMP-1、MMP-2、Vimentin表达减少、Ecadherin表达增多（P＜0.01）。（2）细胞实验结果:SSd干预的MPP组,有降低活化的HSC-LX2细胞线粒体膜电位JC-1的趋势,降低Mito SOX Red荧光表达（P＜0.01）及NLRP3炎性体表达（P＜0.01）,下调了活化的HSC-LX2细胞的增殖及脂质过氧化水平;α-SMA、TIMP-1、MMP-2、Vimentin蛋白及基因表达减少、Ecadherin表达增多（P＜0.01）。结论1.通过BDL大鼠、CCL4诱导小鼠肝纤维化及HSC-LX2活化的模型,发现肝纤维化过程中NLRP3炎性体的持续激活状态。2.证实肝纤维化过程中线粒体来源的ROS是NLRP3炎性体激活的上游信号,SSd有负调控线粒体ROS-NLRP3信号通路的作用。3.SSd通过ERβ雌激素受体途径负调控线粒体ROS-NLRP3信号通路,下调α-SMA、TIMP-1、MMP-2、Vimentin表达、上调Ecadherin表达,减少组织病理学胶原沉积,发挥抑制肝纤维化的作用。