论文部分内容阅读
目的:研究调节性B细胞及相关分子表达水平在细粒棘球蚴持续性感染小鼠过程中的表型改变、变化特点的相关性,探讨其在细粒棘球蚴感染中的免疫作用及与细粒棘球蚴感染发生发展的关系。方法:将96只雌性BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,实验组通过腹腔门静脉接种原头蚴悬液制备细粒棘球蚴感染小鼠模型,对照组腹腔注射等量生理盐水。分别在接种2天、8天、30天、90天、180天和270天收集标本。通过流式细胞术检测小鼠脾脏中调节性B细胞CD1dhiCD5+CD19hi细胞和CD1dhiCD5+CD19hiIL-10+细胞比例;通过ELISA法检测小鼠血清IL-10和TGF-β1的水平;HE染色观察小鼠肝脏的病理学改变;用免疫组织化学法检测IL-10和TGF-β1在肝脏的表达及分布;通过实时荧光定量RT-PCR检测小鼠脾脏淋巴细胞IL-10和TGF-β1 mRNA的表达水平。结果:1)流式细胞术检测结果显示与对照组相比,小鼠脾脏CD1dhiCD5+CD19hi细胞和CD1dhiCD5+CD19hiIL-10+细胞比例在感染后90天、180天和270天显著性升高（P<0.05）。2)实时荧光定量RT-PCR结果显示与对照组相比,在感染早期IL-10和TGF-β1 mRNA均低水平表达,感染后90天IL-10 mRNA的表达显著增加（P<0.05）,TGF-β1 mRNA在感染后30天表达显著升高（P<0.05）,随后均保持较高的水平（P<0.05）。3)HE染色观察结果显示,肝细胞中出现水肿,出现胆管增生,肝脏结构破坏,分不清小叶结构,肝细胞空泡样变性,感染晚期可见淋巴细胞浸润。4)免疫组织化学法结果显示肝脏在细粒棘球蚴感染过程中,IL-10和TGF-β1在肝脏的主要表达部位由早期的肝窦区少量肝细胞胞浆转移至纤维囊壁和病灶处的生发层周围。感染早期,IL-10和TGF-β1均不表达或低水平表达;感染中晚期,随着小鼠体内及肝脏细粒棘球蚴的不断增大增多,IL-10和TGF-β1的表达均显著升高（P<0.05）。5)ELISA检测结果显示与对照组相比,感染早期小鼠血清IL-10和TGF-β1水平显无明显改变;感染中、晚期小鼠血清IL-10和TGF-β1水平均显著升高（P<0.05）。结论:CD1dhiCD5+CD19hi调节性B细胞可能是导致细粒棘球蚴感染免疫抑制的原因之一。在细粒棘球蚴感染的早期,小鼠脾脏CD1dhiCD5+CD19hi调节性B细胞和CD1dhiCD5+CD19hiIL-10+调节性B细胞增加不明显,感染晚期,两种细胞均显著增高,提示调节性B细胞参与了细粒棘球蚴感染的发生发展。细粒棘球蚴感染中,IL-10和TGF-β1表达随体内细粒棘球蚴组织的不断增多增大持续升高,推测Breg发挥抑制作用可能通过调节细胞因子的表达并诱导分泌抑制性细胞因子IL-10和TGF-β1发挥抑制作用。