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目的:研究骨肉瘤中miR-496与β-catenin的表达水平,分析miR-496是否与β-catenin结合,探讨miR-496靶向Wnt/β-catenin通路抑制骨肉瘤细胞侵袭转移的分子机制。方法:本研究首先通过miRwalk和miRanda生物信息学软件分析,寻找能与靶基因β-catenin(β-链蛋白,CTNNB1)结合的miRNAs,结果发现20个miRNAs可能是β-catenin的潜在靶miRNAs;进一步分析发现,其中,miR-496与β-catenin结合特异性最好、稳定性最强。在骨肉瘤组织和瘤旁骨纤维化组织中,通过q RT-PCR检测miR-496表达,Western blot检测β-catenin的表达,分析miR-496和β-catenin表达之间的关系;在不同转移潜能的骨肉瘤细胞株中q RT-PCR检测miR-496的表达,Western blot检测β-catenin及Cyclin D1、MMP-7表达,分析miR-496和β-catenin及Cyclin D1、MMP-7表达之间的关系;合成miR-496 mimics、点突变序列(PM)、Scramble,分别转染MG63骨肉瘤细胞,q RT-PCR检测miR-496在不同细胞株中的表达,western blot检测β-catenin及Cyclin D1、MMP-7表达,分析miR-496表达和β-catenin及Cyclin D1、MMP-7表达之间的相关性;Transwell实验检测miR-496转染前后骨肉瘤细胞转移能力变化。结果:(1)生物信息学方法预测到与CTNNB1结合的靶miRNAs有20个;其中,miR-496与CTNNB1的结合稳定性最高,特异性最好。(2)骨肉瘤组织中miR-496低表达,而瘤旁骨纤维化组织中miR-496高表达,两者之间的表达水平有显著性差异(P<0.01);骨肉瘤组织中β-catenin高表达,瘤旁骨纤维化组织中β-catenin低表达,两者之间的表达水平有显著性差异(P<0.01)。miR-496与β-catenin表达呈负相关,miR-496可能抑制β-catenin表达。(P<0.01)。(3)高转移细胞株SOSP-9607中miR-496低表达,β-catenin、CyclinD1、MMP-7均高表达;低转移细胞株U-2OS中miR-496高表达,β-catenin、Cyclin D1、MMP-7表达,miR-496和三个蛋白的表达水平在不同转移细胞系中有显著性差异(P<0.01)。miR-496可调控β-catenin的表达水平,而β-catenin表达水平与Cyclin D1、MMP-7正相关,可能与骨肉瘤转移有关。(4)MG63-miR-496 mimics细胞株中miR-496表达增高,而β-catenin表达下调;而MG63-miR-Scramble、MG63-miR-496-PM、MG63三个细胞株中,miR-496表达水平无变化,β-catenin表达水平也没有明显变化。说明miR-496表达增高后,可以下调β-catenin表达;而miR-496点突变后,miR-496由于无法和β-catenin结合发生降解反应,导致β-catenin的表达水平不发生变化,证实了miR-496能和β-catenin结合。(5)miR-496高表达细胞株MG63-miR-496 mimics中侵袭细胞计数明显低于其他三组(P<0.01),MG63、MG63-miR-Scramble、MG63-miR-496-PM三组之间侵袭细胞计数无显著性差异(P>0.05)。miR-496高表达能抑制β-catenin的表达,从而抑制骨肉瘤细胞的侵袭转移。结论:(1)生物信息学方法分析发现miRNA-496可能是β-catenin结合稳定性最强,特异性最好的靶miRNA。(2)骨肉瘤组织中miRNA-496和β-catenin表达具有负相关性。(3)骨肉瘤细胞中miRNA-496和β-catenin表达具有负相关性,且与骨肉瘤的转移有关。(4)miRNA-496靶向β-catenin,下调Cyclin D1、MMP-7表达,抑制骨肉侵袭转移。