miR-375靶向FZD4参与Wnt/β-catenin通路在子宫颈癌中的作用及其机制研究

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目的:  明确miR-375表达水平对子宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭等生物学特性的影响,并对miR-375发挥上述作用的靶基因及调控通路进行初步探讨,揭示miR-375在子宫颈癌中的可能作用及其分子机制。  方法:  在宫颈癌细胞株SiHa中,采用细胞瞬时转染技术,转染miR-375模拟物及抑制物相关片段建立miR-375过表达和低表达细胞模型,转染FZD4 siRNA相关序列建立FZD4低表达细胞模型,荧光显微镜下拍照确认转染效率。进一步通过实时荧光定量PCR法与Western Blot法分别确认miR-375与FZD4的转染效果。确认成功建立相应细胞模型后,利用Western Blot法检测Wnt信号通路β-catenin蛋白的表达水平,分别采用CCK8法、划痕实验、Transwell法检测细胞增殖、迁移、侵袭情况。  结果:  1.经细胞转染,各组细胞中miR-375相关序列转染效率达90%以上,与相应阴性对照组相比较,miR-375 mimics组中miR-375表达上调(8.93±0.96)倍(P=0.001),细胞增殖、迁移能力降低(P=0.001),侵袭能力下降(42.95±10.31)%(P=0.046);miR-375 inhibitor组细胞中miR-375表达下调(35.61±10.24)%(P=0.001),细胞增殖、迁移能力增强(P=0.001),侵袭能力升高(67.68±13.66)%(P=0.046);  2. 经预测,FZD4为miR-375潜在靶基因,与相应阴性对照组相比较,  miR-375mimics组细胞中FZD4蛋白表达降低(P=0.023),β-catenin蛋白表达降低(P=0.001),FZD4蛋白与β-catenin蛋白表达高度正相关(R=0.951,P=0.001),并且敲低FZD4表达时β-catenin蛋白表达显著下调(P=0.001);  3.经细胞转染,各组细胞中FZD4 siRNA相关序列转染效率达90%以上,与相应阴性对照组相比较,FZD4 siRNA组细胞中FZD4表达下调(47.41±0.79)%(P=0.001),细胞增殖、迁移能力降低(P=0.001),细胞侵袭能力下降(48.32±7.96)%(P=0.046)。  结论:  1.子宫颈癌中,miR-375表达下调促进细胞增殖、迁移与侵袭,参与癌变的进展过程;  2. miR-375通过靶向FZD4参与Wnt/β-catenin通路,实现对子宫颈癌细胞生物学功能的调控。
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