论文部分内容阅读
背景青光眼是一种严重的不可逆性致盲性眼病,其对人类的视力损害仅次于白内障。青光眼病理过程为进展性视神经变性,眼压异常升高是青光眼发病过程中的主要危险因素,但是患者即使眼压被控制在正常水平,视功能损害仍可能继续发展。视网膜视神经节细胞(RGCs)死亡是其视神经损伤的最终共同通路,RGCs的病理改变和凋亡机制在青光眼发病过程中起到了重要作用。NIDD基因是一种与nNOS分子相关的DHHC主导的包含树突状mRNA结构域的蛋白质,其主要通过与nNOS主导的PDZ结构域的相互作用上调nNOS酶的活性。nNOS酶的活性与胶质细胞活化有关。胶质细胞活化尤其是视网膜中的Muller细胞的活化可能是青光眼中RGCs凋亡的一个重要因素。目的本研究旨在根据DBA/2J小鼠中一系列眼部表型变化,建立DBA/2J小鼠青光眼临床诊断标准,并研究DBA/2J小鼠视网膜中NIDD/nNOS的表达变化及其与青光眼表型和RGCs凋亡的相关性。方法3至15月龄的清洁级DBA/2J小鼠共计100只,对其进行眼前节裂隙灯检查,眼底照相,眼压测量,杯盘比凹陷和视神经轴突计数等检查,结合月龄将DBA/2J小鼠分为正常组(normal group, Nor)、青光眼临床前期组(pre-glaucoma group, pre-G)、青光眼组(glaucoma group, G)、青光眼后期组(late glaucoma group, late-G)、青光眼终末期组(terminalglaucoma group, Ter-G)。通过定量RT-PCR和免疫印记的方法分析了NIDD/nNOS mRNA和蛋白的表达趋势,免疫组化方法定位了NIDD/nNOS在DBA/2J小鼠视网膜的空间分布,NIDD/nNOS和NIDD/Miiller细胞的共定位采用了免疫荧光的方法。最后应用TUNEL染色和免疫印迹的方法分析了一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-NAME对DBA/2J小鼠RGCs的保护作用。结果(1)随着青光眼疾病的进展,DBA/2J小鼠眼前节逐渐发生异常,出现虹膜色素脱失,虹膜萎缩,瞳孔变形等变化,DBA/2J小鼠眼压逐渐升高,在青光眼期时达到最高,其后又逐渐下降至正常基线水平。视盘自青光眼期时开始出现病理性凹陷,而后逐渐加深,视神经萎缩逐步明显。(2) nNOS分子的mRNA和蛋白表达在小鼠青光眼期时达到高峰,NIDD分子的蛋白变化趋势与此相似,而NIDD分子的mRNA表达却在小鼠青光眼前期时达到高峰。(3)NIDD与nNOS在视网膜Muller细胞中存在着共定位。(4)腹腔内连续注射NOS抑制剂L-NAME能够阻止视网膜神经节细胞凋亡,本实验主要是通过观察Brn-3a (RGC标记物)的表达增加和NIDD的表达减少来证实此作用的。结论(1)结合临床和病理检查方法建立了DBA/2J小鼠青光眼临床诊断标准。(2)NIDD可能通过nNOS激活Miiller细胞参与了青光眼疾病进展中RGCs损伤的病理过程。(3)在体小鼠腹腔注射一氧化氮合酶抑制剂L-NAME能有效保护RGCs存活。(4)NIDD/nNOS可能参与了青光眼中RGCs损伤的病理过程。