【摘 要】
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猪繁殖与呼吸综合症是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus , PRRSV)引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的传染病
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猪繁殖与呼吸综合症是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus , PRRSV)引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的传染病。PRRSV含有8个开放阅读框,其中GP5蛋白(EP)和膜蛋白(MP)具有很强的免疫原性,一直是重组疫苗的研究热点。本实验利用复制缺陷型腺病毒载体首次成功构建了同时携有EP和MP的重组腺病毒。在构建重组腺病毒的试验中,首先用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法分别扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5和ORF6,将ORF5和ORF6用口蹄疫病毒2A序列串联,再将连接好的E+2A+M基因亚克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,经筛选获得了重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/E+2A+M;然后在大肠杆菌BJ5183内将此重组穿梭质粒和腺病毒骨架载体pAdEasy进行同源重组,获得了插有外源基因的重组腺病毒质粒pAd/E+2A+M;最后,经PacⅠ酶切线性化后转染低代次293细胞,成功地得到含有E+2A+M基因的重组腺病毒。本试验为研制表达猪繁殖与呼吸综合症病毒E和M基因的重组复制缺陷型腺病毒活载体疫苗奠定了基础。
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