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背景:在传统中药中,人参的使用可以追溯到约5000年前,其被广泛用于农产品、膳食、保健品以及药品,并具有多种益处以及治疗特性。人参的标志性生物活性成分是人参皂苷,即三萜皂苷。人参二醇是一种存在于人参的根中的三萜皂苷元单体,并已被证明具有多种生物活性,如抗炎、抗肿瘤和神经保护作用。然而,人参二醇介导的抗炎作用的分子机制尚不清楚,因此深入研究人参二醇的抗炎作用和潜在机制对进一步开发抗炎药有重要的意义。目的:本文旨在揭示人参二醇通过靶向抑制ZFP91调控的巨噬细胞中非经典caspase-8炎症小体和MAPKs的激活,从而抑制炎症因子IL-1β的分泌来发挥抗炎作用,并阐明其抗炎机制。方法:1.在体外实验中,我们使用LPS与ATP共同刺激的THP-1细胞、BMDM细胞,通过采用多种实验方法检测并分析人参二醇在巨噬细胞中的抗炎作用机制。①使用同源建模与分子对接实验检测了人参二醇与IL-1β的结合模式,并采用蛋白质印迹实验、RT-PCR实验、ELISA实验和免疫荧光实验检测了人参二醇对巨噬细胞中IL-1β产生与分泌的影响。②采用蛋白质印迹、RT-PCR实验和免疫荧光实验检测了人参二醇对巨噬细胞中炎性体各组分以及ZFP91表达的影响。进一步将ZFP91 siRNA或ZFP91过表达质粒转染THP-1细胞,检测了人参二醇通过调控ZFP91对炎性体激活的影响。③采用免疫共沉淀实验检测了人参二醇通过调控ZFP91对炎性体复合物组装的影响,并采用免疫荧光实验检测了人参二醇通过调控ZFP91对炎性体复合物共定位的影响。④采用蛋白质印迹实验检测了人参二醇对巨噬细胞中MAPKs激活的影响。进一步将ZFP91 siRNA或ZFP91过表达质粒转染THP-1细胞,检测了人参二醇通过调控ZFP91对MAPKs激活的影响。2.在体内实验中,使用重组腺相关病毒载体（AAV-shZFP91）建立ZFP91敲低小鼠模型。在此基础上建立了急性结肠炎模型以及急性腹膜炎模型,进一步验证人参二醇的抗炎机制。①DSS诱导的结肠炎模型:将小鼠随机分为以下5组（n=8/组）:正常组、DSS组、DSS+ZFP91WT+PD 组、DSS+ZFP91sh组和 DSS+ZFP91sh+PD 组。与饮水对照组小鼠相比,DSS处理的小鼠连续5天饮用含4%DSS的饮水。随着DSS模型的建立,通过检测体重减轻、大便出血和粪便稠度用于疾病活动指数的评估,并收集结肠和血清用于通过免疫组化、ELISA、蛋白免疫印迹实验检测模型中组织学变化以及炎性介质和相关蛋白的表达。②明矾诱导的腹膜炎模型:将小鼠随机分为以下5组（n=8/组）:正常组、Alum组、Alum+ZFP91WT+PD 组、Alum+ZFP91sh 组和 Alum+ZFP91sh+PD 组。WT 或AAV-shZFP91 C57BL/6小鼠腹腔注射700 μg明矾。12小时后,分析炎症细胞亚群,收集并通过流式细胞术分析小鼠腹膜渗出液细胞（PEC）的数量。采用ELISA实验检测腹腔液中炎症因子分泌水平,以及蛋白免疫印迹实验评估模型中炎性体相关蛋白的表达。结果:1.体外实验中,人参二醇在巨噬细胞中的抗炎作用机制研究:①实验结果表明人参二醇与IL-1β存在相互作用位点,并且人参二醇抑制LPS与ATP共同刺激的THP-1细胞与BMDM细胞中IL-1β产生与分泌。②人参二醇抑制巨噬细胞中炎性体各组分以及ZFP91表达。在ZFP91 siRNA或ZFP91过表达质粒转染的THP-1细胞中,人参二醇通过抑制ZFP91调控的炎性体激活来抑制IL-1 β分泌。③进一步的分析表明,人参二醇通过抑制ZFP91的表达从而抑制非经典caspase-8炎症小体的炎性体复合物组装以及炎性体复合物共定位。④同时,人参二醇抑制巨噬细胞中MAPKs激活。在ZFP91 siRNA或ZFP91过表达质粒转染的THP-1细胞中,人参二醇通过抑制ZFP91调控的MAPKs激活来抑制IL-1β分泌。2.在体内实验中,人参二醇的抗炎作用机制研究:①人参二醇显着改善了 DSS诱导的小鼠急性结肠炎,这与模型中AAV-ZFP91敲低小鼠的结果一致。人参二醇抑制DSS诱导的小鼠结肠炎症细胞的侵入,并且人参二醇抑制DSS诱导的急性结肠炎小鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α分泌。同时,人参二醇抑制DSS诱导的小鼠结肠中炎症相关蛋白pro-IL-1β、ZFP91、NLRP3、ASC、cleaved caspase-8、p-ERK、p-JNK 和 p-p38 的表达。②人参二醇明显改善了 Alum诱导的小鼠急性腹膜炎,这与模型中AAV-ZFP91敲低小鼠的结果一致。人参二醇抑制腹膜炎小鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α分泌,并且人参二醇抑制小鼠腹膜炎中炎症细胞的募集。同时,人参二醇抑制小鼠腹膜炎中炎症相关蛋白 pro-IL-1β、ZFP91、NLRP3、ASC、cleaved caspase-8、p-ERK、p-JNK 和 p-p38 的表达。结论:我们首次报道了人参二醇抑制巨噬细胞中IL-1β的分泌,主要是通过抑制ZFP91调控的非经典caspase-8炎症小体和MAPKs的激活,研究结果为人参二醇治疗炎症性疾病的抗炎机制提供了理论证据。