论文部分内容阅读
背景:Th2细胞及其细胞因子在肿瘤发生发展中具有重要作用。IL-4及IL-13是重要的Th2型细胞因子,可以促进调节性T细胞(Treg)、骨髓来源免疫抑制细胞(MDSC)及肿瘤相关巨噬细胞(TAM)向肿瘤部位的浸润,下调Th1型反应及细胞毒性T淋巴细胞(CTL)抗肿瘤免疫应答,促进肿瘤免疫抑制微环境的形成。因此,靶向IL-4、IL-13具有改善肿瘤免疫抑制微环境,促进抗肿瘤效应细胞的产生、浸润及功能发挥,增强抗肿瘤免疫应答的潜力。肿瘤具备异质性,其抗原多变,限制了针对肿瘤特异抗原的疫苗研发及其取得显著临床效果。化疗是肿瘤临床治疗的常用手段,化疗药物可直接杀伤肿瘤细胞并释放大量肿瘤抗原,并且可能诱导肿瘤细胞免疫原性死亡,可激发机体针对多重肿瘤抗原产生抗肿瘤细胞免疫应答,但这一免疫效应往往受限于肿瘤免疫抑制机制的影响。目的:利用小鼠乳腺肿瘤模型,旨在探讨靶向IL-4及IL-13主动免疫对肿瘤生长、转移及免疫应答的调控潜能,同时探讨其与化疗药物杀伤肿瘤及诱导肿瘤细胞免疫原性死亡这一效应可能的协同作用。研究将有助于揭示IL-4与IL-13在肿瘤中的角色,并为肿瘤免疫治疗提供新的策略。方法:本研究以乙肝核心抗原(HBcAg)病毒样颗粒(VLP)为载体,利用基因重组技术获得呈递IL-4及IL-13抗原肽的VLPs疫苗。以预防性策略免疫小鼠后,接种4T1细胞建立小鼠乳腺癌原位模型及转移模型,考察肿瘤生长及肺转移情况,并探讨免疫应答特点。此外,在小鼠乳腺癌原位模型中,待肿瘤长至5-8 mm时,对小鼠进行化疗药物米托蒽醌瘤内注射。实验期间持续监测肿瘤大小,在实验终点牺牲小鼠。进行小鼠肿瘤称重;记录肺转移结节数目;以流式细胞术检测小鼠脾脏淋巴细胞中免疫效应细胞如Th1与CTL水平,以及免疫抑制细胞如Treg及MDSC的水平。结果:成功制备了呈递IL-4抗原肽及IL-13抗原肽的VLP疫苗,免疫小鼠后诱导了持续的、高水平的特异抗体应答。在小鼠乳腺癌原位模型及转移模型中,HBcAg-IL-4与HBcAg-IL-13 VLPs显示了对肿瘤生长与转移的抑制作用,且同时靶向IL-4与IL-13有更显著的抑制效果。流式分析显示靶向IL-13与IL-4显著抑制了 MDSC、Treg与Th2细胞水平,增强了 Th1与CD8+细胞水平。此外,在靶向IL-4和IL-13主动免疫的同时,联合化疗药物瘤内注射,获得了对肿瘤生长更明显的抑制,提示两个干预策略发生了协同作用。结论:抗细胞因子主动免疫靶向IL-4与IL-13可改善肿瘤免疫抑制微环境、抑制肿瘤的生长及转移,且对于化疗药物瘤内注射具有协同作用,提示其作为肿瘤免疫干预手段,尤其与其它肿瘤治疗手段联合具有显著应用前景。