乳酸菌在肠道的黏附和定植是其实现益生作用的先决条件,其中S层蛋白起着关键作用。卷曲乳杆菌是典型的含S层蛋白的菌株,然而其S层中蛋白的组成和比例未见报道,特别是S层蛋白被分泌出胞后,其在细胞壁表面的组装过程未知。鉴于此,研究卷曲乳杆菌S层中蛋白的比例、丰度及其组装方式,将为卷曲乳杆菌在畜禽肠道健康干预中的应用以及S层蛋白功能的挖掘和利用提供理论依据和方法。本试验从实验室前期保存的略阳乌鸡肠道样品中筛选出高黏附的乳酸杆菌,并将其作为后续试验对象,分离S层蛋白,并分析其S层蛋白与耐受性、黏附的关系;结合超高分辨液相色谱质谱联用和全基因组测序,分析卷曲乳杆菌S层的蛋白组成和丰度以及可溶上清、培养上清中蛋白的种类和比例,并构建检测载体,解析S层蛋白的遗传基础;分离得到的可溶性S层蛋白冻干定量后,利用S层蛋白的自组装特性将其组装在枯草芽孢杆菌芽孢的表面。试验得到以下结果:1.集约化饲养的略阳乌鸡其肠道微生物的多样性优于纯散养的乌鸡,但是纯散养的乌鸡肠道中乳酸菌的丰度高于集约化饲养的乌鸡,因此,从散养的乌鸡肠道中筛出八株S层蛋白含量较高的乳酸菌,分别是两株L.reuteri,一株L.agilis,三株L.delbrueckii,一株L.crispatus和一株E.faecalis,将其中一株黏附率最高的L.crispatus作为后续试验的研究对象,命名为L.crispatus LW,该菌株是革兰氏阳性菌,形态为细长杆状,弯曲,成链出现。2.L.crispatus LW平台期的菌体用5 M中性LiCl孵育1 h,得到的S层蛋白产量和纯度较高,初步测定其S层蛋白的含量为25%,采用5 M中性LiCl处理1 h不能完全将S层蛋白剥离。当把L.crispatus LW的S层蛋白去除后,该菌株的黏附率显著下降（P<0.01）,对酸碱、机械力和溶菌酶的耐受性降低（P<0.01）。3.全基因组测序结果显示L.crispatus LW的基因组中含有9个S层蛋白的编码基因,S层蛋白的质谱结果表明正常情况下只表达三个,分别是orf00226,orf01719,orf00290,其中orf00226占绝对优势,且orf00226是一个新的S层蛋白的编码基因。除S层蛋白外,L.crispatus LW的细胞壁外还有其他的分泌蛋白及大量的胞内蛋白,亚细胞定位结果显示,胞壁蛋白、胞膜蛋白、周质蛋白和胞外蛋白占蛋白总数比重分别为0.46%、16.01%、62.18%和21.35%。L.crispatus LW S层的质谱结果进一步确定了胞内蛋白的存在,与S层蛋白的质谱相比,蛋白比例相同,整体丰度下降,orf00226的表达量最高。4.透析液上清和菌体培养上清的质谱结果证明了S层蛋白的存在,且其中蛋白的比例一致,胞外蛋白占蛋白总数比重最大。与可溶性S层蛋白孵育后的芽孢其表面可分离出S层蛋白。研究结论:纯散养的略阳乌鸡是筛选高黏附性乳酸菌的重要来源。S层蛋白与L.crispatus LW的高黏附性密切相关,对菌体有较好的保护作用。L.crispatus LW的S层远比想象的多样化和复杂,除含有典型的S层蛋白外,还存在胞外基质锚定蛋白、发挥免疫调节作用的其他蛋白等,其S层蛋白的基因不同于已发现的基因。可溶性S层蛋白能成功组装在芽孢表面,利用S层蛋白组装在芽孢表面来增加芽孢的黏附性是可行的。