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目的:类风湿性关节炎(RA)是一种累及多关节的慢性炎症性自身免疫疾病,其主要特征是以侵蚀形式出现的骨破坏。骨破坏能导致不可逆转的关节损伤和功能障碍,影响RA患者工作和生活。目前RA研究主要关注于滑膜炎症,对骨破坏的研究有限。因此,本研究拟(1)明确艾灸对RA家兔治疗作用中是否有骨保护效应;(2)探索Wnt信号通路的Dvl2、OPG/RANKL/RANK系统和NF-κB信号通路是否参与艾灸治疗RA家兔的骨保护效应;(3)探索艾灸治疗RA家兔骨破坏中Dvl2对OPG/RANKL/RANK系统和NF-κB信号通路的影响,为临床艾灸治疗RA提供理论基础。方法:将66只CCV级新西兰兔按体重和性别分层,并根据随机数字表等比例分为空白组、模型组、模型+艾灸组、Dvl2过表达阴性组、Dvl2过表达组、Dvl2干扰阴性组、Dvl2干扰组、模型+艾灸+Dvl2过表达阴性组、模型+艾灸+Dvl2过表达组、模型+Dvl2干扰阴性组和模型+Dvl2干扰组,每组6只。实验第1周向膝关节腔内注射弗氏完全佐剂(CFA)制备RA新西兰兔骨破坏模型,干预措施为6周的“肾俞”和“足三里”艾灸治疗。实验第7周结束后通过改良番红O-固绿染色和SMASH评分评估软骨损伤,ELISA检测膝关节滑膜灌洗液炎性因子IL-10,PCR Array检测膝关节软骨/骨BGP、Collagen Ⅱ、Dvl2、OPG、RANKL、RANK 和 NF-κB 信号通路分子(p50、p52、IKKα、IKKβ、IκBoα、IKBKG、RelB、c-Rel、TAB3 和 MAP3K7)mRNA 表达水平。通过 Dvl2过表达和干扰慢病毒调控膝关节软骨/骨Dvl2的表达。两组比较用独立样本T检验;三组及以上比较用单因素方差分析,方差齐则选用LSD法进行两两组间比较,方差不齐则选用Games-Howell检验进行两两组间比较。P≤0.05认为差异具有统计学意义。结果:(1)新西兰兔膝关节软骨/骨改良番红O-固绿染色:模型组软骨表层破坏、几乎完全丢失红色染色只剩下蓝色反染、软骨细胞增殖明显、部分软骨层脱落;艾灸组软骨表层粗糙、浅表层染色丢失、软骨细胞增生、排列较模型组整齐;模型+艾灸+Dvl2过表达组膝关节软骨/骨病理表现与模型组相似;模型+Dvl2干扰组膝关节软骨/骨病理表现与模型+艾灸组相似。(2)新西兰兔膝关节软骨损伤SMASH评分:模型组与空白组比较升高(P≤0.05),艾灸组与模型组比较降低(P≤0.05);模型+艾灸组过表达Dvl2能升高SMASH评分加重软骨损伤(P≤0.05),其损伤程度与模型组差异无统计学意义(P>0.05);模型组干扰Dvl2表达能降低SMASH评分减轻软骨损伤(P≤0.05),其减轻程度与模型+艾灸组比较差异无统计学意义(P>0.05)。(3)与空白组比较,模型组膝关节滑膜灌洗液IL-10表达升高(P≤0.05);与模型组比较,艾灸组膝关节滑膜灌洗液IL-10表达降低(P≤0.05)。(4)与空白组比较,模型组膝关节软骨/骨Dvl2、OPG、RANK和RelB表达降低(P≤0.05),p50、IKKβ和c-Rel表达升高(P≤0.05);与模型组比较,艾灸组膝关节软骨/骨 Dvl2、OPG、RANKL、p50、IKKβ 和 c-Rel 表达降低(P≤0.05),RelB 表达升高(P≤0.05)。(5)与Dvl2过表达阴性组比较,Dvl2过表达组膝关节软骨/骨Dvl2、OPG、c-Rel、IKKα和IKKβ表达升高(P≤0.05),p50和p52表达降低(P≤0.05);与Dvl2干扰阴性组比较,Dvl2干扰组膝关节软骨/骨Dvl2、OPG、RANKL、RANK和IKKα表达降低(P≤0.05),c-Rel和TAB3表达升高(P≤0.05)。(6)与模型+艾灸+Dvl2过表达阴性组比较,模型+艾灸+Dvl2过表达组膝关节软骨/骨Dvl2、OPG、p50、p52、IKKα和IκBα表达升高(P≤0.05);与模型+Dvl2干扰阴性组比较,模型+Dvl2干扰组膝关节软骨/骨Dvl2、RANK和IKKβ表达降低(P≤0.05),OPG、RANKL、p50 和 p52 表达升高(P≤0.05)。(7)与空白组比较,模型组膝关节软骨/骨BGP和Collagen Ⅱ表达降低(P≤0.05);与模型组比较,艾灸组BGP表达降低(P≤0.05)以及Collagen Ⅱ表达无差异(P>0.05)。结论:(1)6周艾灸治疗能改善RA家兔骨破坏,具有骨保护效应。(2)艾灸治疗RA家兔发挥骨保护效应的作用机制可能有以下三点:①由膝关节软骨/骨下调的Dvl2介导;②有膝关节软骨/骨OPG/RANKL/RANK系统以及NF-κB信号通路中p50、IKKβ、RelB和c-Rel信号分子的参与;③有膝关节腔滑膜液IL-10的参与。(3)艾灸治疗RA家兔骨保护效应中膝关节软骨/骨Dvl2可能介导NF-κB信号通路p50和IKKβ表达,但Dvl2可能不介导OPG/RANKL/RANK系统的表达。