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花生粕作为花生油加工的主要副产品,含有大量的生物活性成分,具有较高的营养和研究价值。利用有益菌发酵花生粕提取其中的生物活性物,加工制成食品添加剂、功能性食品等,有利于增加花生粕的附加值。但是目前对于混菌特别是纳豆芽孢杆菌和红曲霉发酵花生粕的研究没有报道过,本文主要是利用纳豆芽孢杆菌和红曲霉混菌固态发酵花生粕,充分利用两种菌的优势,探究两种菌的最佳混菌配方,得到富含纳豆激酶(NK)、γ-氨基丁酸(GABA)、降胆固醇肽、多糖等生物活性物质的花生粕发酵物以及提取分离这些活性物质的简便快速方法,为花生粕的高值化利用和保健品行业提供参考。论文主要分为以下5部分:1、混菌固态发酵花生粕产纳豆激酶和γ-氨基丁酸的工艺研究。目的:探究混菌固态发酵花生粕产纳豆激酶和γ-氨基丁酸的最佳的发酵条件;方法:通过单因素实验和正交试验探究最优的发酵条件;结果:温度31℃,时间46 h,料水比1:0.4 g/mL,菌种比例(纳豆芽孢杆菌:红曲霉)2:1,接种量6%,在此条件下发酵物中NK的活力为844.56±13.80 U/g,GABA含量为105.25±0.25 mg/g。2、混菌固态发酵花生粕提取分离花生粕降胆固醇肽。目的:探究花生粕发酵物中降胆固醇肽的提取条件和最优的发酵条件;方法:(1)采用酸提醇沉的方法探究了花生粕降胆固醇肽的提取条件;(2)通过单因素和正交试验探究得到降胆固醇肽的最佳发酵条件;结果:(1)以0.10 mmol/L的酸溶液为花生粕发酵物的浸提液,浸提液再加入3倍体积的50%乙醇溶液除杂,此条件下花生粕多肽提取量最高,且多肽降胆固醇的效果最佳。(2)降胆固醇肽的最佳发酵条件为:发酵温度31℃,时间46 h,菌种比例(纳豆芽孢杆菌:红曲霉)1:1,接种量6%,在此条件下测得花生粕多肽含量为72.21±0.74 mg/g,花生粕多肽(3.5 mg/mL)对胆酸钠的吸附率为61.73%±2.82%,对牛磺胆酸钠吸附率为52.45%±0.55%。1 mg/mL的花生粕多肽经过人工胃液和肠液处理后,其对胆酸钠的吸附率为30.86%±1.65%,对牛磺胆酸钠的吸附率为32.17%±1.44%,可以看出花生粕多肽经过胃液和肠液处理后仍具有很好的降胆固醇的效果。3、花生粕抗氧化物的发酵条件探究。目的:探究混菌固态发酵花生粕获得花生粕抗氧化物的最优发酵条件;方法:以花生粕发酵物对羟自由基(OH)清除率、对1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)的清除率及对铁离子的还原力为评价指标,通过单因素实验和正交试验探究发酵条件对花生粕发酵物的抗氧化效果影响。结果:在温度31℃,时间58 h,料水比1:0.5 g/mL,菌种比例(纳豆芽孢杆菌:红曲霉)1:3,接种量6%的条件下发酵的花生粕提取物的抗氧化活性最高,其对·OH的清除率为88.41%±0.42%,对·DPPH的清除率为68.50%±1.23%,铁离子的还原力的OD值为0.755±0.01。4、花生粕多糖的发酵条件探究。目的:探究纳豆芽孢杆菌和红曲霉混菌发酵花生粕产花生粕多糖的最优发酵条件、花生粕多糖提取的提取条件并测定花生粕多糖的抗氧化效果;方法:采用热水浸提、乙醇溶液沉淀法来提取分离花生粕发酵物中的花生粕多糖;以单因素实验考查了发酵温度、时间、料水比、菌种比例(纳豆芽孢杆菌:红曲霉)、接种量对花生粕发酵物中花生粕多糖含量的影响,在此基础上进行正交试验,得到花生粕多糖的最佳发酵条件;通过对·OH的清除率、对·DPPH的清除率和对铁离子的还原力探究花生粕多糖的抗氧化效果。结果:温度31℃,时间70 h,料水比1:0.4 g/mL,菌种比例(纳豆芽孢菌:红曲霉)2:1,接种量6%,在此条件下发酵得到的花生粕提取物多糖含量为84.46 mg/g。采用三倍体积的90%乙醇溶液沉淀发酵液得到花生粕粗多糖含量最高,其得率为90.04%±1.87%。醇沉得到的花生粕粗多糖(100 mg/mL)对·OH的清除率为74.82%±1.59%,对·DPPH的清除率为60.00%±0.46%,对铁离子的还原力的OD值为0.42。5、花生粕发酵物活性成分的提取方法研究。目的:探究纳豆激酶(NK)、γ-氨基丁酸(GABA)、降胆固醇肽、多糖等发酵活性物质的提取分离的方法,找到一种能简单快速提取分离这些活性物的方法。方法:通过比较直接水提法、水提加酸调节不同pH值、直接酸提法,探究提取花生粕活性成分最优的提取方法;结果:花生粕发酵物经过水提取,离心;其残渣可提取多糖,上清液加酸调节pH为4.84静置后进行离心;其中沉淀中可得到纳豆激酶,上清液富含花生粕多肽和γ-氨基丁酸以及花生粕抗氧化物,离心上清液通过NKA-9大孔树脂进行静态吸附,可以分离得到花生粕多肽。通过这种水提酸沉过柱法,每克发酵物可以分离得到花生粕多糖(36.81±1.48 mg/g)、纳豆激酶(NK活性为678.04±3.19 U/g)、γ-氨基丁酸(103.33±0.72 mg/g)和花生粕多肽(35.05±0.58 mg/g)。