TRIM35（Tripartite motif protein 35,TRIM35）是E3泛素连接酶三方基序家族蛋白的成员,也称为HLS5或MAIR,具有E3泛素连接酶的功能,在调控RIG-I信号通路中发挥着重要作用。TRIM家族蛋白中的许多成员已被报道是天然免疫和抗病毒反应中的重要调节因子,在诱导干扰素和促炎细胞因子的过程中起着重要作用。哺乳动物的TRIM35已被证明在癌症、细胞死亡和先天性抗病毒免疫反应中起着至关重要的作用,它不仅诱导转染细胞凋亡,而且抑制肿瘤细胞的生长、克隆形成和致瘤性。然而禽TRIM35在抗病毒天然免疫反应中的作用仍不清楚,本研究通过克隆鸭TRIM35（du TRIM35）基因,揭示了du TRIM35在调节鸭抗病毒天然免疫反应中的作用,丰富了鸭源病毒逃逸天然免疫反应的分子机制。主要内容如下:1.Du TRIM35的克隆及其对VSV和DTMUV增殖的影响本研究首次克隆得到了du TRIM35的全长c DNA,采用氨基酸序列比对和遗传进化分析,发现du TRIM35与鹅的亲缘关系最近。通过荧光定量RT-PCR分析发现du TRIM35在鸭的肝脏、心脏、小脑和胰腺中表达丰度较高。采用荧光定量RT-PCR、Western Blot和TCID50等方法发现Se V、VSV和DTMUV感染鸭胚成纤维细胞（DEFs）后,du TRIM35的表达水平显著上调;超表达du TRIM35显著提高VSV和DTMUV在DEFs中的增殖水平,而干扰内源性的du TRIM35则显著降低VSV、DTMUV在DEFs中的增殖滴度。2.Du TRIM35抑制Se V和du RIG-I诱导的IFN-β产生通过双荧光素酶和荧光定量RT-PCR分析发现du TRIM35显著抑制Se V诱导的IFN-β产生及Viperin、PKR和CCL5等ISG的表达。为了进一步筛选du TRIM35抑制RLRs信号通路的关键靶点,将du TRIM35真核表达质粒与RLRs信号通路中关键信号分子（du RIG-I、du MDA5、du MAVS、du TBK1、du IKKε、du IRF7）的真核表达质粒共转染DEFs,发现du TRIM35显著抑制鸭RIG-I（du RIG-I）诱导的IFN-β、IRF7和NF-κB启动子的活性,并呈剂量依赖性。3.Du TRIM35通过靶向du RIG-I抑制IFN-β产生通过免疫共沉淀实验发现du TRIM35与du RIG-I相互作用,通过构建du TRIM35和du RIG-I各结构域的截短突变体,发现du TRIM35蛋白N端的RING结构域与du RIG-I的CARD结构域是它们相互作用的关键结构域。4.Du TRIM35通过干扰du RIG-I与ds RNA结合,从而拮抗IFN-β的产生本研究将du TRIM35真核表达质粒分别与RLRs信号通路中关键信号分子（du RIG-I、du MDA5、du MAVS、du TBK1、du IKKε、du IRF7）的真核表达质粒共转染293T细胞,通过Western Blot检测发现du TRIM35不通过泛素-蛋白酶体途径降解du RIG-I。然而RNA结合实验发现du TRIM35蛋白能够干扰du RIG-I与ds RNA的结合,抑制du RIG-I诱导的IFN-β产生。综上所述,本研究首次揭示了du TRIM35在调控鸭天然免疫反应中的作用,发现du TRIM35可以促进VSV和DTMUV等病毒的增殖;du TRIM35通过靶向du RIG-I抑制Se V和du RIG-I诱导的IFN-β产生;du TRIM35通过干扰du RIG-I与ds RNA结合,从而拮抗IFN-β产生。本研究揭示了du TRIM35在调节鸭抗病毒天然免疫反应中的作用,丰富了鸭源病毒逃逸天然免疫反应的分子机制。