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目的: 胶质母细胞瘤是最常见的脑部肿瘤,其特点是预后极差,极易复发(几乎100%),复发即为高级别。近年来,尽管胶质瘤治疗技术水平不断提高,患者的预后依然很差,原因是很多化疗药物无法透过血脑屏障,现阶段应用替莫唑胺(TMZ)治疗是一线治疗策略,但在很多情况下出现药物抵抗和复发,所以新的治疗靶点及靶向化疗药物是胶质瘤研究的重要方向。 胶质母细胞瘤(glioblastoma multiform,GBM)中雄激素受体(androgen receptor,AR)表达异常升高与GBM进展密切相关,但雄激素来源不明。有研究显示在正常情况下睾酮是胆固醇在限速酶CYP17A1的催化作用下生成的,而转录因子胆固醇调节元件结合蛋白2(SREBP2)调节GBM胆固醇合成。提示GBM可能利用胆固醇自身合成睾酮。近期研究中发现GBM患者睾酮水平脑脊液>血液,而正常人与之相反;SREBP2在GBM样本中高表达,SREBP2过表达显著增加CYP17A1的转录,但具体调节机制仍不清楚。以此基础拟开展以下研究:首先要证明GBM能否自身合成睾酮;用荧光素酶报告基因的方法来证明SREBP2是CYP17A1的转录因子;体外实验来证明SREBP2-CYP17A1-AR途径能否调节GBM生长;CYP17A1的抑制剂与胆固醇合成限速酶HMGCR的抑制剂联合用药是否对抑制GBM细胞生长具有协同作用。研究将进一步揭示GBM生长机制并为开发抑制雄激素合成新策略提供依据。 方法: 1、应用RT-PCR及高效液相色谱-质谱的方法来证实胶质母细胞瘤能自身合成雄激素。 2、应用荧光素酶报告基因的方法分析CYP17A1的启动子存在SRE。 3、应用免疫印迹及RT-PCR的方法证明外源SREBP2的表达促进CYP17A1的转录。 4、应用免疫印迹的方法检测当葡萄糖供给增加时对胆固醇、睾酮的合成的影响。 5、应用免疫印迹、MTT及细胞划痕的方法检测SREBP2-CYP17A1-AR途径对胶质母细胞瘤增殖、迁移的影响。 6、应用免疫印迹及MTT的方法检测AKT抑制剂与AR激活剂对胶质母细胞瘤生长的影响 结果: 1、胶质母细胞瘤能自身产生雄激素。 2、荧光素酶报告基因证明CYP17A1启动子存在SRE,在-443和-271位点p=0.001,有统计学意义。 3、外源转染SREBP2,使CYP17A1表达增加,促进CYP17A1的转录。 4、胆固醇抑制剂他汀类药物(辛伐他汀和氟伐他汀),能抑制SREBP2-CYP17A1-AR通路,抑制胶质母细胞瘤的增殖、迁移能力。 5、增加葡萄糖能使胆固醇、雄激素合成升高,同时增加SREBP2的转录 6、CYP17A1的抑制剂醋酸阿比特龙,抑制雄激素的合成,对胶质母细胞瘤的增殖、迁移能力也有抑制作用。但在蛋白水平上由于药物代偿作用,CYP17A1限速酶表达虽然增多,但雄激素受体AR合成减少,对SREBP2-CYP17A1-AR通路的抑制作用。 7、两种药物联合使用,能抑制SREBP2-CYP17A1-AR通路,抑制胶质母细胞瘤的增殖、迁移能力。 8、AR激活剂能激活SREBP2-CYP17A1-AR通路,使胆固醇合成酶HMGCR表达升高,使SCAP表达升高,增加SREBP2的转录 9、AKT抑制剂能抑制胆固醇的合成,从而抑制胶质母细胞瘤的生长,但随着AR激活剂浓度的增加,使胶质瘤细胞中雄激素逐渐增多,抑制能力逐渐减弱。 结论: 研究结果表明,异常葡萄糖、胆固醇的代谢导致雄激素受体依赖的胶质母细胞瘤能自身产生雄激素,并且促进胶质瘤的发生发展。抑制胆固醇和雄激素的产生对肿瘤的增殖、迁移有影响,并且这一发现可能为胶质母细胞瘤患者的诊断和治疗提供新的靶点。