【摘 要】
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本研究从山东省青岛市某羊场采集疑似羊口疮病料痂皮,经剪碎、研磨、离心等处理后在羊睾丸细胞上进行接种培养传代,分离到一株病毒,通过对其形态特征观察、理化特性研究、动
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本研究从山东省青岛市某羊场采集疑似羊口疮病料痂皮,经剪碎、研磨、离心等处理后在羊睾丸细胞上进行接种培养传代,分离到一株病毒,通过对其形态特征观察、理化特性研究、动物回归实验、病毒滴度测定及分子生物学鉴定,证实分离到羊口疮病毒。根据GenBank中已公布的Orfv的全基因组序列和B2L、F1L、VIR的基因序列,设计3对特异性引物,应用PCR扩增、胶回收、重组质粒转化、阳性菌筛选、质粒测序等方法对分离株的B2L、F1L和VIR基因进行扩增、克隆和测序,并将其基因序列与其他已公布的不同来源的Orfv分离株进行比较分析。结果表明,本研究利用羊睾丸细胞成功分离出一株羊口疮病毒,并命名为ORFV-Q。本分离株能够引起羊睾丸细胞产生明显细胞病变,通过传代至11代,细胞开始出现病变和出现80%CPE的时间分别稳定在接种后24h和72h左右。病毒粒子为椭圆形,外周有囊膜包被,在细胞质内增殖,病毒对温度、氯仿、乙醚等均敏感。接种毒株的羊只出现丘疹、脓疱等典型的羊口疮症状,毒株TCID50为10-5.5。相关基因序列分析表明, ORFV-Q分离株的B2L基因、F1L基因和VIR基因与GenBank已公布毒株的该序列之间核苷酸同源性分别为96.8%-98.9%、96.2%～99.9%、94.9%～99.8%,且该分离株与中国陕西株和湖北株同源关系最近。
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