【摘 要】
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目的观察麝香乌龙丸对高浓度1-磷酸鞘胺醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)诱导下人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC)血管内皮屏障的保护作用,探
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目的观察麝香乌龙丸对高浓度1-磷酸鞘胺醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)诱导下人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC)血管内皮屏障的保护作用,探讨麝香乌龙丸(SXWLW)稳定血管屏障进而减少滑膜血管新生治疗类风湿关节炎(Rheumatiod arthritis,RA)的机制。方法将HUVEC分成4组:(1)对照组:1640+10%FBS培养基,培养24小时;(2)S1P组:1640+10%FBS培养基,培养24小时后更换为含10μmol/L S1P的1640培养基,刺激30min;(3)S1P+SXWLW组:浓度为320μg/mL SXWLW+1640+10%FBS培养基,培养24小时后,更换为含10μmol/L S1P的1640培养基,刺激30min;(4)S1P+S1PR2拮抗剂JTE013组:浓度为1μmol/L JTE013(S1PR2拮抗剂)+1640+10%FBS培养基,培养24小时后,更换为含10μmol/L S1P的1640培养基,刺激30min。采用免疫荧光检测HUVEC中细胞连接相关蛋白ROCK、ZO-1的变化,Western blot检测RhoA、ROCK、磷酸化RhoA激酶(p-ROCK)、ZO-1蛋白的表达水平。结果(1)闭锁小带蛋白1(Zonula occludens-1,ZO-1)免疫荧光的变化:对照组中,ZO-1蛋白主要集中表达在细胞膜上,显示出内皮细胞的形态。用浓度为10μmol/L S1P刺激后,与正常组相比,细胞膜上的ZO-1蛋白表达减少,部分分散于胞浆中。与S1P组相比,S1P+SXWLW组及S1P+S1PR2拮抗剂组,细胞膜上ZO-1蛋白表达均增多。磷酸化ROCK(p-ROCK)免疫荧光的变化:对照组中,p-ROCK蛋白表达较少,主要分布在胞浆以及胞核周围;用浓度为10μmol/L S1P刺激30min后,p-ROCK蛋白的表达显著上调,集中分布在胞浆以及胞核;S1P+SXWLW组及S1P+S1PR2拮抗剂JTE013组中p-ROCK蛋白的表达明显减少。(2)对HUVEC细胞中RhoA、ROCK、p-ROCK、ZO-1蛋白的表达的影响:与正常组比较,S1P组细胞ZO-1蛋白表达降低显著(P<0.05),RhoA蛋白表达明显升高(P<0.05),ROCK蛋白表达明显升高且其磷酸化水平明显升高(P<0.05)。与S1P组比较,麝香乌龙丸组和S1PR2拮抗剂JTE013组ZO-1蛋白表达均增加(P<0.05),RhoA蛋白表达下降(P<0.05),ROCK蛋白表达明显下降且其磷酸化水平明显下降(P<0.05)。结论麝香乌龙丸能够通过RhoA/ROCK通路,调控HUVEC细胞连接相关蛋白ROCK、p-ROCK及ZO-1的表达,稳定HUVEC的血管屏障,这可能是麝香乌龙丸治疗类风湿关节炎的机制之一。图5幅;表1个;参151篇。
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