基于RhoA/ROCK信号通路探讨丹参素对MRC-5细胞的作用机制

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目的:本文基于RhoA/ROCK信号通路,探究中药单体丹参素对人胚肺成纤维细胞MRC-5的作用机制,从而推测丹参素是否具有抗肺纤维化的作用,为治疗肺纤维化提供临床新药物、新思路。  方法:依据课题设计方案,以人胚肺成纤维细胞MRC-5为研究对象,丹参素为实验药物,低分子肝素钠为对照药物,TGF-β1为诱导药物,分别设立:空白组(A组)、TGF-β1组(B组)丹参素组(C组)、丹参素+TGF-β1组(D组)、TGF-β1+丹参素组(E组)、TGF-β1+低分子肝素钠组(F组)。首先,进行人胚肺成纤维细胞MRC-5的体外培养,并成功进行细胞复苏及细胞传代;然后应用TGF-β1、丹参素、丹参素+TGF-β1(先预防性应用丹参素1h,后应用TGF-β1)、TGF-β1+丹参素(先应用TGF-β1诱导1h,后治疗性应用丹参素)、TGF-β1+低分子肝素钠(先应用TGF-β1诱导1h,后应用低分子肝素钠)干预细胞24h;使用CKK-8法检测细胞增殖,免疫荧光法检测细胞TNF-α、RhoA、ROCK1核浆表达情况,Real time PCR法检测细胞RhoA mRNA、ROCK1mRNA表达水平,Western blotting检测细胞RhoA、ROCK1、MYPT1、p-MYPT1、MLC2、p-MLC2的蛋白表达。  成果:TGF-β1干预下的人胚肺成纤维细胞MRC-5的RhoA/ROCK信号通路被激活,可能产生一系列致肺纤维化机制;丹参素可以抑制人胚肺成纤维细胞MRC-5增殖、减少TNF-α及RhoA/ROCK信号通路相关因子的表达,相比抗凝药物低分子肝素钠作用更明显。  结论:TGF-β1可以激活RhoA/ROCK信号通路致细胞纤维化,丹参素通过抑制TNF-α及RhoA/ROCK信号通路相关因子的表达,可能对细胞具有抗纤维化的保护作用,不建议将低分子肝素钠用于临床治疗肺纤维化。
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