随着社会的发展及科技的进步化石能源的使用也与日俱增,化石能源的开采造成了大量的土壤原油污染。原油污染的土壤中含有大量的致癌致畸成分,对人们的健康及收入造成极大的影响。有试验表明紫茉莉漆酶在紫茉莉降解土壤中原油污染物中发挥了作用。本试验通过转基因的手段将紫茉莉漆酶基因转入模式植物拟南芥中,利用抗性平板筛选,用PCR扩增、Southern blot对获得的拟南芥植株进行鉴定,通过原油对转基因拟南芥进行胁迫进行生理水平上的鉴定,以期获得转漆酶基因材料,为研究漆酶基因在石油降解中的作用提供材料。本研究获得的研究结果如下:1.本研究通过RT-PCR的方法对转录组高通量测序筛选到的表达量提高的紫茉莉漆酶基因进行了克隆,生物信息学分析结果表明紫茉莉漆酶基因的开放阅读框（ORF,Open Reading Frame）全长为1 719 bp,编码572个氨基酸,蛋白质分子质量63.34 k D,等电点7.97。同源序列比对及系统进化树分析发现,该基因编码的蛋白质较为保守,并没有随着进化产生较大差异。同时亚细胞定位预测结果表明紫茉莉漆酶存在于细胞核、内质网、高尔基体等与蛋白质合成的细胞器中及液泡、线粒体等细胞中发生氧化还原反应的细胞器中。2.提取紫茉莉漆酶基因的真核表达载体p BI-Mir LAC,并转入GV3101农杆菌中。PCR及测序结果表明,真核表达载体成功转入农杆菌中。3.利用花粉管通道法将紫茉莉漆酶基因转入野生型拟南芥基因组中。对T₀-T₂代种子进行抗性平板检测,以野生型拟南芥基因组DNA为阴性对照,去离子水为空白对照,p BI-Mir LAC质粒为阳性对照对转基因拟南芥总DNA进行PCR鉴定,发现6株携带有紫茉莉漆酶Mir LAC的T₂代转基因拟南芥。4.对转基因拟南芥进行Southern blot鉴定。结果表明,以上鉴定的6株植株中有4株有阳性信号,表明目的基因片段已插入拟南芥基因组中。可以作为材料进行后续的研究。5.对T₃代转基因拟南芥进行了生理水平上的鉴定。在原油胁迫下测定转基因型拟南芥漆酶活性、相对电导率、超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛含量等生理指标。结果表明转基因拟南芥的漆酶活性在4个株系中各不相同,且野生型拟南芥中未检测出漆酶活性。在原油胁迫处理条件下,野生型拟南芥及转基因拟南芥的相对电导率、SOD活性及丙二醛含量都随石油胁迫时间的延长不断地上升而转基因型拟南芥相对野生型拟南芥的上升速率较慢。在相同胁迫时间内随着原油污染物浓度升高野生型拟南芥的SOD活性不断升高后又降低,转基因型拟南芥的SOD活性不断升高,表明转基因型拟南芥对原油污染物的抵抗能力更强。相同胁迫时间内原油污染物浓度升高转基因型及非转基因型拟南芥的丙二醛含量都在不断升高,但转基因型拟南芥的丙二醛含量始终低于非转基因型。