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羊口疮疾病是由羊口疮病毒引起的一种急性、接触性、嗜上皮性传染病。患病羊主要表现在口唇部严重溃烂、结痂，导致其采食困难，营养摄入不足，大大降低了成年山羊生产性能和羔羊的生长发育。羊口疮近年来在我国各地山羊养殖场发生的频度不断上升，给养殖业造成严重的的经济损失。但迄今为止，关于我国羊口疮疾病的流行病学特点还不甚清楚。因此，本研究开展了羊口疮病原的PCR检测方法研究，并对我国奶山羊主要养殖省份陕西、山东和云南所采集的样品进行了检测。本研究首先利用犊牛睾丸原代细胞对患羊口角结痂中的羊口疮病毒进行培养壮大；根据GenBank中收录的羊口疮病毒B2L、F1L和VIR的基因组序列，设计三对检测引物。同时提取羊口疮细胞毒DNA作为PCR模版，对多重PCR的退火温度，延伸时间以及反应体系中各成分浓度尤其是引物浓度和dNTP浓度进行调整和优化，寻找合适的反应体系与条件，并对本方法的特异性、灵敏度进行了研究；最后，将所建立的多重PCR检测方法应用于从陕西、山东、云南奶山羊养殖场外表正常奶山羊采集的血样和棉拭子样本的病毒检测。结果显示，在犊牛睾丸原代细胞成功培养了羊口疮病毒，接种病毒的细胞在接种后3天可观察到细胞变圆、肿胀、细胞间质变宽，严重时甚至出现细胞脱落；成功建立了羊口疮病原多重PCR检测方法，此方法具特异性强，灵敏度高，能够区分羊口疮病毒和羊痘病毒，对羊口疮病毒的最低检测下限为100.2TCID50/ml；各地采集的样品检测结果显示，山东、云南和陕西三省各地区奶山羊血样中羊口疮病毒检出率分别为56.71%、71.23%和34.73%，棉拭子样品中病毒检出率为1.49%、1.37%和0。结论：首先，本研究成功培养并壮大了羊口疮病毒；同时根据羊口疮病毒的三个基因建立了羊口疮病原多重PCR检测方法；最后运用已建立的方法完成了陕西、山东和云南地区奶山羊样品的检测。