下咽癌是头颈鳞状细胞癌中恶性程度最高的恶性肿瘤之一。在过去的数十年,虽然国内外专家不断探索下咽癌治疗的新思路和新方法,但下咽癌患者的预后并无明显改善。然而导致下咽癌高度恶性和预后差的病理机制尚未完全阐明,迫切需要探究新的研究方向和治疗靶点。越来越多的研究发现表观遗传修饰与肿瘤发生和发展密切相关。DNA甲基化是DNA甲基转移酶（DNMTs）催化的最常见的表观遗传修饰。在DNMTs中,DNMT1是负责DNA甲基化模式精确复制和维护的关键酶,其介导的抑癌基因启动子的高甲基化能够导致肿瘤抑癌基因的转录失活,从而参与肿瘤发生和发展。DNMT1过表达以及促进肿瘤生长的作用在胃癌、膀胱癌、宫颈癌等恶性肿瘤中已被证实。由于DNMT1是介导甲基化的关键酶,确定该酶在下咽癌中的作用以及与抑癌基因表达调控的关系,有利理解下咽癌发生发展的潜在病理机制。作为一种抑癌基因,死亡相关蛋白激酶1（DAPK1）参与多种内部和外部凋亡刺激诱导的细胞死亡过程,然而抑制DAPK1的表达可能导致肿瘤的发生和转移。研究显示,DAPK1的表达降低与基因启动子的高甲基化有关。目前,DAPK1启动子高甲基化已在胃癌、食管癌、喉癌等恶性肿瘤被检测出,但介导其甲基化的机制尚未完全阐明。研究发现,DNMT1在多种肿瘤中能够通过促进GSTP1、CDH1、P16等抑癌基因启动子区的甲基化抑制抑癌基因的表达。然而,尚无研究DNMT1是否通过调控DAPK1基因启动子区的甲基化而参与下咽癌发生发展的机制。研究目的本研究主要是探究DNMT1在下咽癌Fadu细胞生长和转移中的作用以及DNMT1与DAPK1表达调控的作用机制。研究方法通过DNMT1-siRNA转染沉默下咽癌Fadu细胞中DNMT1的表达,从而构建DNMT1低表达细胞,PCR、Western Bolt用于检测DNMT1和DAPK1的表达水平。然后分别通过CCK8实验、流式细胞凋亡分析、流式细胞周期分析、划痕实验以及Transwell实验检测DNMT1对下咽癌Fadu细胞增殖、凋亡、细胞周期及迁移、侵袭的影响。最后通过甲基化特异性PCR(（MS-PCR）检测DAPK1启动子区的甲基化状态。研究结果1.沉默DNMT1在下咽癌Fadu细胞中的表达能够抑制下咽癌Fadu细胞的增殖能力;2.沉默DNMT1在下咽癌Fadu细胞中的表达能够促进下咽癌Fadu细胞的凋亡能力;3.沉默DNMT1在下咽癌Fadu细胞中的表达能够阻滞下咽癌Fadu细胞的细胞周期,抑制其分裂过程;4.沉默DNMT1在下咽癌Fadu细胞中的表达能够降低下咽癌Fadu细胞的迁移和侵袭能力;5.DAPK1在下咽癌Fadu细胞中低表达,沉默DNMT1在下咽癌Fadu细胞中的表达后,DAPK1在下咽癌Fadu细胞的表达水平明显升高;6.沉默DNMT1在下咽癌Fadu细胞中的表达后,DAPK1启动子区发生去甲基化。结论该研究发现DNMT1能够通过促进DAPK1启动子区的甲基化而抑制DAPK1的表达,从而促进下咽癌Fadu细胞生长和转移,丰富了有关下咽癌发生发展机制及导致其高度恶性的潜在分子机制的基础研究,为发现下咽癌新的治疗靶点提供了科学依据。