研究背景:肺癌已成为全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤,已成为一个严重的公共健康问题。2017年最新统计显示,新发肺癌人数达到80万,是我国名副其实的“第一癌症”。基因突变等遗传学改变和DNA甲基化等表观遗传异常被认为在肺癌的发生发展过程中起至关重要的作用。其中,表观遗传突变被认为在肿瘤的发展过程中起关键作用。例如,DNA异常甲基化导致人类肿瘤的发展,研究揭示,肿瘤组织中抑癌基因的启动子区域DNA高甲基化能导致其沉默,进而促进肿瘤进展。因此,研究肿瘤相关基因启动子高甲基化失活的功能及机制,有利于揭示肺癌发病机制,为肺癌的综合防治提供理论基础。DBCCR1是在人类膀胱癌组织中低表达的抑癌基因,研究揭示DBCCR1低表达能通过高甲基化导致基因沉默。目前在口腔鳞癌、肝癌、神经胶质瘤中,已有文献报道出现了DBCCR1相关的高甲基化现象。但是,目前肺癌中有关DBCCR1研究的资料还比较缺乏。因此,在不同的癌种中,DBCCR1或许在抑癌基因的活化中扮演重要作用。为了研究肺癌中DBCCR1的潜在机制,我们分析肺癌患者组织和人肺癌细胞系中DBCCR1和DNA甲基化转移酶DNMT1的表达,并应用基因功能获得或缺失的策略探究DBCCR1调控DNMT1对肺癌发生发展的影响。本研究为DBCCR1在肺癌中的作用提供实验基础,为探寻肺癌新分子标志物及干预靶点提供理论依据。目的:探讨DBCCR1在肺癌发生发展中的作用及其潜在机制,为探寻肺癌新分子标志物及干预靶点提供理论依据。方法:1、RT-QPCR检测比较肺癌组织和癌旁周围正常组织的DBCCR1和DNMT1的表达水平;2、利用慢病毒体系应用RNA干扰和过表达技术建立DBCCR1稳定敲低和过表达的肺癌细胞株;3、CCK-8试验检测DBCCR1对肺癌细胞增殖的影响;4、细胞划痕实验分析DBCCR1对肺癌细胞迁移的作用;5、Transwell细胞侵袭实验分析DBCCR1对肺癌细胞侵袭的作用;6、RT-QPCR和免疫印迹分析DBCCR1调控DNMT1的作用;7、采用SPSS18.0统计软件。根据数据分布类型选择表达方法及组间统计学检验方法。采用卡方检验、t检验、F检验、非条件Logistic回归等方法分析。结果:1、RT-QPCR检测比较了肺癌组织和癌旁周围正常组织的DBCCR1的表达水平:结果显示肺癌组织中DBCCR1的表达明显低于癌旁周围的正常组织;进一步分析DBCCR1的表达水平与临床病例特征的相关性,发现DBCCR1低表达与肿瘤侵犯和转移呈正相关;肿瘤分期越晚,DBCCR1表达越低。DBCCR1低表达的患者,高表达增殖标记物Ki-67（p=0.000）,而且肿瘤转移（p=0.001）和肿瘤侵袭（p=0.000）显著增多。Kaplan-Meier生存分析表明,DBCCR1高表达患者的总生存期更长。进一步对多种影响生存的潜在预后因素进行Cox回归分析,结果发现,Ki-67和DBCCR1表达水平、肿瘤分期、肿瘤转移和肿瘤侵袭,是相对独立的总生存期预后标志物。2、DBCCR1对肺癌细胞生长的影响:利用慢病毒体系应用RNA干扰和过表达技术建立DBCCR1稳定敲低和过表达的肺癌细胞株;通过CCK-8实验检测细胞增殖,结果显示,过表达DBCCR1显著降低肺癌细胞株A549增殖;而敲低DBCCR1显著增强A549细胞增殖。3、DBCCR1对肺癌细胞迁移的影响:细胞划痕实验分析DBCCR1对肺癌细胞迁移的作用,结果发现,过表达DBCCR1显著降低A549细胞迁移;而敲低DBCCR1显著增强A549细胞迁移。4、DBCCR1对肺癌细胞侵袭的影响:Transwell细胞侵袭实验显示过表达DBCCR1显著降低A549细胞侵袭;而敲低DBCCR1显著增强A549细胞侵袭。5、DBCCR1调控DNMT1表达:RT-QPCR检测比较了肿瘤组织和肿瘤周围正常组织的DNMT1的表达水平,结果显示肿瘤组织中DNMT1的表达明显高于周围的正常组织,且DNMT1的表达与DBCCR1表达呈负相关;体外实验证实过表达DBCCR1的A549细胞,DNMT1的表达明显受到抑制;而沉默DBCCR1的A549细胞,DNMT1的蛋白水平和RNA水平均显著升高。结论:1、DBCCR1的低表达与肺癌进展相关,是肺癌患者不良预后因素。2、DBCCR1可抑制肺癌细胞A549细胞增殖、迁移与侵袭,并可能通过调控DNMT1抑制肺癌的发生发展。