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肾细胞癌（renal cell carcinoma,RCC）是泌尿系最常见的恶性肿瘤之一,肾癌最常见的组织学类型是透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,cc RCC）,约占75-85%。肾透明细胞癌是典型的富含血管肿瘤,血管生成与肾透明细胞癌的预后和进展密切相关,针对肿瘤新生血管的靶向治疗逐渐成为晚期肾癌重要治疗方法。但目前以靶向血管内皮生长因子（VEGF）的抗血管生成治疗因其固有的缺陷仍不能完全令人满意,所以寻找新的靶标已成为下一步的研究热点。肿瘤血管生成是肿瘤生长和转移的前提,它受多种血管因子调节,而血管生成素/酪氨酸激酶受体2（Ang/Tie2）在血管生成中发挥重要作用。Tie2主要表达于内皮细胞,某些巨噬细胞和单核细胞也表达Tie2,即Tie2表达阳性单核巨噬细胞（Tie2 expressing monocytes,TEMs）,越来越多的研究发现TEMs在肿瘤的血管新生中发挥独特的作用。B7-H3为新近发现的协同共刺激分子家族成员,在T细胞介导的肿瘤免疫应答中发挥重要作用,既往研究发现B7-H3可在多种实体瘤肿瘤血管组织上表达且与临床预后密切相关,提示B7-H3在肿瘤血管生成中发挥重要作用。目前B7-H3与肾透明细胞癌的血管生成关系尚不明确。本研究旨在探讨B7-H3与Tie2在肾透明细胞癌组织血管中表达意义及其在肾透明细胞癌血管生成中的作用。第一部分B7-H3和Tie2在肾透明细胞癌血管内皮中表达及意义目的:检测B7-H3与Tie2在肾透明细胞癌组织血管中表达情况,分析其与肾透明细胞癌临床病理特征的关系及其临床预后意义,初步探讨其在肾透明细胞癌血管生成中的作用。方法:1.应用免疫组织化学方法检测82例肾透明细胞癌及20例癌旁正常组织芯片标本B7-H3和Tie2血管内皮表达,并分析其与肾透明细胞癌病理特征、微血管密度之间的关系及其相关性。2.应用免疫荧光和激光共聚焦扫描显微镜技术研究B7-H3和Tie2在肾透明细胞癌肿瘤血管内皮中表达定位情况。结果:1.B7-H3在肾透明细胞癌血管中表达显著高于正常组织血管表达（P<0.001）;B7-H3血管表达与肾透明细胞癌组织分级（P=0.008）、原发肿瘤分期（P=0.012）、淋巴结转移（P=0.018）、远处转移（P=0.048）及TNM分期（P=0.021）相关。2.Tie2在肾透明细胞癌血管中表达显著高于正常组织血管表达（P=0.007）;Tie2血管表达与肾透明细胞癌组织分级（P=0.249）、远处转移（P=0.459）无关,而与原发肿瘤分期（P=0.001）、淋巴结转移（P=0.010）以及TNM分期（P=0.005）密切相关;B7-H3与Tie2表达呈正相关（r=0.306,P=0.005）。3.CD34标记的微血管密度（microvessel density,MVD）与肾透明细胞癌肿瘤分级（P=0.032）、原发肿瘤分期（P=0.004）、淋巴结转移（P=0.007）、远处转移（P=0.002）及TNM分期（P<0.001）密切相关;B7-H3与Tie2血管表达均与微血管密度正相关（P<0.05）。4.免疫荧光染色及激光共聚焦显微镜扫描结果显示B7-H3与Tie2均表达于肿瘤血管内皮,且在肾透明细胞癌血管内皮中存在共表达。结论:1.肾透明细胞癌组织B7-H3、Tie2血管表达与肾透明细胞癌进展和预后密切相关,二者可作为肾透明细胞癌预后判断有效的内皮标志物;2.B7-H3、Tie2在肾透明细胞癌血管生成中可能具有协同作用,有望成为肾透明细胞癌抗血管生成联合靶向治疗有效的靶标。第二部分B7-H3+TEMs介导肾透明细胞癌血管生成的实验研究目的:探讨B7-H3+TEMs在肾透明细胞癌血管生成中的作用。方法:1.采用流式细胞术检测肾透明细胞癌组织及正常肾组织中TEMs上B7-H3表达情况;2.免疫组化方法检测CD34水平,分析肾透明细胞癌组织B7-H3+TEMs高表达组和B7-H3+TEMs低表达组之间微血管密度的差异;3.将786-O肾癌细胞株与B7-H3+TEMs或B7-H3-TEMs共培养,分别收集B7-H3+TEMs和B7-H3-TEMs培养上清液作为条件培养基,通过小管形成实验观察B7-H3+TEMs对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）小管形成的影响;4.将条件培养基作用于小鼠主动脉环,通过小鼠主动脉环实验观察B7-H3+TEMs对小鼠主动脉环的新生血管形成的影响。结果:1.流式细胞分析显示肾透明细胞癌组织中TEMs表面B7-H3分子表达率为45.10±17.78%,正常肾组织表达率为10.28±4.28%;肾透明细胞癌组织TEMs上B7-H3分子表达率高于正常肾组织表达率,差异具有统计学意义（P<0.001）。2.B7-H3+TEMs低表达组微血管密度为76.55±20.80,B7-H3+TEMs高表达组微血管密度为103.81±29.28;B7-H3+TEMs高表达组MVD显著高于B7-H3+TEMs低表达组MVD（P=0.027）。3.小管形成实验结果显示B7-H3+TEMs组HUVECs的小管形成能力显著强于B7-H3-TEMs和空白对照组（P<0.001）。4.小鼠主动脉环实验显示B7-H3+TEMs组主动脉环新生血管形成能力显著高于B7-H3-TEMs和空白对照组（P<0.001）。结论:B7-H3+TEMs可促进肾透明细胞癌的血管生成,B7-H3+TEMs可作为肾透明细胞癌抗血管生成治疗有效靶标。