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肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)是泌尿外科三大较为常见恶性肿瘤之一,由于缺乏有效早期诊断标志物,死于转移性肾癌的患者约占40%左右。B7-H3是B7家族成员之一,B7-H3分子负调控T细胞免疫应答,抑制抗肿瘤免疫反应,并在多种恶性肿瘤中异常高表达。B7-H3在ccRCC脉管系统以及转移病灶中高表达,提示B7-H3在ccRCC的肿瘤血管生成、肿瘤转移及不良预后中发挥作用。但B7-H3分子对ccRCC细胞生物学功能的调控机制未见报道,探究B7-H3分子在ccRCC进展中的作用及机制,有希望为治疗ccRCC提供新的干预策略。研究目的:探究B7-H3分子在ccRCC细胞迁移和侵袭中的分子机制。研究方法:1.通过The Cancer Genome Atlas(TCGA)数据库分析B7-H3在ccRCC组织及癌旁组织中的差异表达及其与临床预后关系。2.利用慢病毒载体构建B7-H3低表达稳转细胞模型。3.通过CCK-8、Transwell实验探究B7-H3对ccRCC细胞系786-O和ACHN的增殖、迁移和侵袭能力的影响。4.RT-qPCR(Real-time-quantitative PCR)检测ccRCC细胞转移相关基因表达变化。5.利用Co-IP(co-immnoprecipation)实验检测 786-O 和 ACHN 细胞中 B7-H3 与 FN(Fibronectin)蛋白间相互作用,探讨B7-H3影响肿瘤细胞转移的作用机制。6.小干扰RNA沉默FN表达,Transwell实验检测外源性FN对786-O和ACHN细胞迁移侵袭能力的影响。7.Western blotting检测上皮-间充质细胞转化(Epithelial-mesenchymal transformation,EMT)相关蛋白及信号通路相关蛋白表达水平变化。研究结果:1.在TCGA数据库中,发现B7-H3分子在ccRCC中的表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。相比B7-H3表达较低的ccRCC患者,B7-H3表达较高的ccRCC患者的无病生存期缩短,差异有统计学意义(P<0.05)。2.成功构建B7-H3低表达细胞模型后,CCK-8检测细胞增殖能力发现,B7-H3对ccRCC细胞增殖能力无明显影响,差异不具有统计学意义(P>0.05)。Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力发现,B7-H3低表达组发生迁移和侵袭的细胞数目低于B7-H3正常表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。3.RT-qPCR检测敲低B7-H3表达后ccRCC细胞中转移相关基因的差异表达发现,相比B7-H3正常表达组,B7-H3低表达的ccRCC细胞中E-cadherin在mRNA水平的表达升高,N-cadherin、MMP9、Integrin α5 和 Integrin β1 在 mRNA 水平的表达降低,其差异均有统计学意义(P<0.05),提示低表达B7-H3抑制细胞迁移和侵袭的过程中可能有EMT进程相关标志蛋白及细胞外基质的参与。4.TCGA数据库分析发现B7-H3与FN的表达存在正相关,co-IP实验则表明ccRCC细胞中B7-H3与FN存在相互结合,免疫组织化学进一步验证B7-H3与FN蛋白表达存在正相关(R=0.5)。5.使用小干扰RNA沉默FN表达发现,相对FN正常表达组,沉默FN表达组细胞迁移和侵袭数量降低,其差异有统计学意义(P<0.05)。6.Western blotting实验发现,相比B7-H3低表达组,外源性FN与B7-H3正常表达组的结合能力更高,其差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell实验检测细胞迁移侵袭能力发现,相比未作用外源性FN的细胞,B7-H3正常表达组中,外源性FN作用后的细胞发生迁移和侵袭的数量更多,其差异有统计学意义(P<0.05)。B7-H3低表达组中的外源性FN作用则不存在这种细胞迁移和侵袭数量的变化,其差异不具有统计学意义(P>0.05)。7.Western blotting实验发现B7-H3与FN在促进肿瘤细胞转移中具有协同作用,并激活PI3K/AKT和p38/ERK通路促进细胞EMT进程。研究结论:B7-H3在ccRCC肿瘤组织中的表达高于癌旁组织,并且与ccRCC患者的预后不良相关。ccRCC细胞上表达的B7-H3能够与外源性FN结合,并促进细胞EMT进程,激活PI3K/AKT和p38/ERK信号通路,从而促进细胞迁移和侵袭。B7-H3与FN的结合作用能够为治疗ccRCC肿瘤转移提供新的干预策略。