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2001年首次报道Viperin是一种受干扰素、病毒等刺激诱导的基因。近年来,已经证实Viperin不仅能被多种因素诱导而大量表达,而且还具有广谱的抗病毒和抗细菌等作用,甚至还参与调节细胞信号通路的功能。由此可见,Viperin在天然免疫中发挥非常重要的角色。随着对Viperin的深入和全面研究,逐渐揭示Viperin的抗多种不同病毒、抗细菌等作用机制。本研究从长白鸭的外周淋巴细胞中扩增鸭Viperin基因并利用生物信息学方法对其进行详尽地基因分析。基于Viperin参与抗病毒作用,通过鸭Viperin蛋白抗NDV的试验研究,以揭示鸭Viperin抗NDV的分子机制。本研究首先采集鸭抗凝血并分离其外周血淋巴细胞,然后将外周淋巴血细胞提取鸭的总RNA反转录成cDNA。根据已公布的鸭的全基因组中RSAD2序列(登录号NW004676922.1以及XM 005018580.1)设计相应的扩增引物,最终获得了鸭Viperin ORF序列。根据获得的鸭Viperin基因序列,使用生物信息学软件对扩增的鸭Viperin序列进行详尽的功能分析。结果表明,鸭Viperin的蛋白结构与其它已公布物种的Viperin蛋白非常相似,都包括N端区域、中心区域和C端区域。根据Viperin的基因序列,将Viperin基因克隆到pGEX 4T-1原核表达载体,分别利用原核表达方法表达并纯化Viperin的融合蛋白。将该融合蛋白免疫1月龄家兔,检测血清抗体水平,成功制备出兔抗Viperin的血清。早期研究已证实多种病毒可诱导Viperin的表达,于是我们开展鸭Viperin在体内体外水平的表达分析。一方面,通过制备并培养鸭的原代胚胎细胞(DEF),利用不同剂量poly(I:C)和NDV感染DEF后检测Viperin的表达。结果表明,poly(I:C)和NDV均能刺激诱导Viperin的表达。另一方面,以2周龄长白鸭的为动物材料,使用用NDV感染鸭来检测Viperin在不同脏器的分布。结果发现,正常生理情况下,不同脏器的Viperin含量具有较大的差异,Viperin主要分布于血液,其次是肺脏和脾脏,肾脏和肌肉较低;以对照组相比,在NDV感染后,不同脏器Viperin的表达都有不同程度的增加。该结果表明,NDV在细胞水平和鸭体上均能够增强Viperin表达。为了进一步确定鸭Viperin发挥抗病毒的关键区域,我们构建了Viperin的缺失片段(包括N端和C端缺失,分别命名为Vip△N和Vip△C)以及设计抑制鸭Viperin表达的siRNA序列。将鸭的Viperin基因(Viperin, Vip△N和Vip△C)克隆到pCAGGS真核表达载体上并转染DEF细胞;利用siRNA技术,转染siRNA质粒于DEF细胞,在转染后24小时后使用NDV感染DEF,在感染后不同时间内收集样品以检测NDV的病毒复制情况。结果表明,过表达鸭Viperin的情况下,能显著的抑制NDV感染,试验组的NDV滴度明显低于对照组;转染siRNA质粒后能抑制Viperin的表达,并有利于NDV复制。另外,从过表达鸭VipAN和Vip△C结果看,截短体的抗病毒作用已经显著降低,N端缺失后的Viperin还具有有限的抗病毒作用,而C端缺失后则导致Viperin抗病毒作用的完全丧失。这表明,Viperin的C端区域是其发挥抗病毒作用的关键区域。综上所述,本研究研究了鸭Viperin基因的生物特性和探究该蛋白的生物学功能,发现poly(I:C)和NDV等因素均能诱导Viperin的表达,说明鸭Viperin与其它物种Viperin具有类似的特征;Viperin蛋白能够发挥显著的抗NDV的作用,进一步发现Viperin的C端是其发挥抗病毒的关键区域。