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目的本研究旨在验证UHRF2在乙肝病毒(Hepatitis B virus,HBV)阳性肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达,分析其与HBV阳性HCC患者预后的关系,并进一步阐明UHRF2通过HBV-HBx-Ets1-CDK2-UHRF2通路促进肝细胞癌发生发展的分子机制。基于本研究,探讨UHRF2作为HCC生物标志物和潜在治疗靶点的可行性,为HCC患者的早期诊断和预后提供了理论基础。方法应用蛋白印迹(Western blot,WB)检测20例HBV阳性HCC组织及癌旁组织中UHRF2的表达;利用免疫组化技术(Immunohistonchemistry,IHC)验证87例HBV阳性HCC组织及癌旁组织中UHRF2的表达情况;WB实验法在HepG2、HepG2.2.25、Hep AD38和HepG2-NTCP四种HCC细胞中验证HBV对UHRF2的影响。UHRF2分别在Hep AD38和HepG2.2.25细胞中敲低和过表达,实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和WB技术检测UHRF2基因的敲低和过表达效率。划痕实验、Transwell实验和EdU(5-Ethynyl-2’-deoxyuridine)实验分别检测HBV阳性HCC细胞的迁移、侵袭和增殖能力。机制上,采用WB实验方法、免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)实验技术和免疫荧光(Immunofluorescence,IF)实验验证HBV的x蛋白(病毒反式激活因子x,HBx),CDK2(Cyclin-dependent kinases),UHRF2和Ets1(c-Ets-1)之间的关系。结果WB和免疫组化显示UHRF2在HBV阳性HCC中显著高表达,并确定了其高表达与87例HBV阳性HCC患者的预后呈负相关。划痕实验、Transwell实验和EdU实验结果显示HBV阳性HCC细胞中UHRF2的过表达可以促进其迁移,侵袭和增殖;而敲低UHRF2则抑制HBV阳性HCC细胞的迁移,侵袭和增殖。WB实验、免疫共沉淀实验和免疫荧光结果显示HBx通过Ets1蛋白上调CDK2;CDK2与UHRF2相互作用并激活UHRF2第643位丝氨酸残基的磷酸化,磷酸化后的UHRF2泛素化受到抑制;HBx通过阻止UHRF2的降解来维持UHRF2的稳定性,进而上调UHRF2。结论(1)UHRF2蛋白在HBV阳性HCC中上调,其表达水平与HCC患者的预后呈负相关,揭示UHRF2可能参与HCC的发生发展等过程。(2)利用体外HBV阳性HCC细胞癌模型,发现UHRF2的过表达可促进细胞的迁移,侵袭及增值,提示UHRF2的过表达可对HCC发挥促癌作用。(3)UHRF2可能通过HBV-HBx-Ets1-CDK2-UHRF2通路促进HCC的发生发展,揭示UHRF2促进HCC发生发展可能的具体机制。