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在全世界的胃肠道肿瘤中,肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)居于第六位,是与癌症相关死亡的一种胃肠道肿瘤。与HBV(Hepatitis B virus,HBV)相关的HCC具有较高的进展速度和恶化的预后特征。迄今为止已进行了大量研究,但不幸的是,在肝细胞癌的发生发展中,目前尚无针对HBV引起的肝病的最终药物或治疗方法。慢性肝病(CLD)的重要诱因中,乙型肝炎病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)占据一席之位,发挥着重要作用,进而促成HCC的发生发展。HBx基因编码具有多种功能的蛋白(HBxAg),包括信号转导,转录激活,DNA修复,细胞周期控制和抑制蛋白降解,其在调控肿瘤细胞增生、化疗耐药及其侵袭转移等多种生物学功能方面发挥着重要作用,从而促使肝癌的复发转移。HCC细胞阳性表达K19(Keratin19,K19)具备癌干细胞的特征,根据肝癌干细胞学说理论,肝前体细胞(Hepatic progenitor cells,HPC)发挥着干细胞的角色,细胞角蛋白19作为癌干细胞特异性的分子标记物,在HCC生物学方面,例如复发转移等,其阳性表达的HCC相较于阴性表达的HCC极易出现,成为肝癌防治的一大难点。为了明确HBx蛋白调控K19表达在HCC复发转移中的作用,我们通过对HCC细胞系转染来调控HBx表达,通过对HBx稳定转染的SMMC-7721、HepG2细胞进行刮痕和侵袭实验,在迁移和侵袭能力方面,HBx能够对HCC细胞具有促进作用。接下来我们采用SMMC-7721、HepG2肝癌细胞株,对K19基因进行调控,同样进行刮痕和侵袭实验进一步明确HBx调控K19促进肝癌细胞侵袭转移。另外,本实验在临床上收集了肝细胞癌的样品,为了明确肝癌组织中HBx和K19表达的相关性,免疫组织化学方法被用来检测并分析HBx、K19表达水平高低与肝细胞癌患者年龄、性别、肝硬化、以及肝癌分化程度、术前AFP水平、血管侵犯、合并HBV感染、TNM分期的关系,评估HBx、K19在肝癌术后复发、转移、预后预测中的临床意义。[目 的]1.明确HBx和K19对肝细胞癌侵袭、迁移能力的影响。2.研究HBx和K19在肝细胞癌中的表达,并剖析HCC患者的表达与临床病理要素与预后的关系。[方法]1.通过对 SMMC-7721 与 HepG2 转染 LV K19、K19 shRNA 与 LV HBx 对相关基因进行调控。2.成功对SMMC-7721与HepG2细胞进行HBx和K19转染后,通过侵袭、划痕实验,明确HBx与K19是否促进HCC细胞迁移和侵袭能力。3.免疫组化分析肝癌组织样本中HBx和K19表达与肝癌临床病理因素,复发转移及生存时间的关系。[结 果]1.在HCC中,HBx可能经过K19促成肿瘤细胞侵袭、迁移。2.HBx与K19在肝细胞癌患者组织中的表达具有相关性,HBx与K19的表达与分化程度差、术前AFP水平较高、有血管侵犯、TNM分期晚的HCC患者有关。[结 论]1.HBx上调K19的表达促进HCC侵袭与迁移。2.HBx与K19在HCC中的表达具有相关性,HBx和K19阳性提示肿瘤分期晚,恶性程度高。