论文部分内容阅读
传染性喉气管炎(Infectious laryngotractheitis，ILT)是由传染性喉气管炎病毒(ILTV)引起的鸡的一种急性上呼吸道传染病。该病分布于世界各地，被OIE列为B类传染病。上世纪60年代，我国也发现本病。此后，相继在许多省市流行，给我国养禽业造成了严重的经济损失。目前国内外主要使用弱毒疫苗预防本病，但它们都存在着疫苗株毒力偏强、潜伏感染、易于返祖以及疫苗株和野毒株无法鉴别的缺点，从而不利于ILT的根除。随着分子生物学的发展，利用基因工程疫苗预防ILT已成为人们的共识。禽痘病毒载体是继痘苗病毒以后发展起来的又一动物病毒载体。由于禽痘病毒具有宿主范围窄，可插入较大的外源基因，在动物体内能产生一过性感染，却能诱发保护性免疫应答，易于工业化生产等优点，使其从众多的活病毒载体中脱颖而出，成为当前重组病毒载体疫苗研究的热点，并且在人和许多动物重要传染病重组疫苗的研制中得到广泛应用。本研究利用鸡痘病毒弱毒疫苗株282 E4株为载体，构建了表达ILTV烟台株gB及gD主要抗原表位基因和鸡IgY重链恒定区基因的重组鸡痘病毒，并检测了其对鸡抵抗ILTV强毒株攻击的免疫保护作用。研究主要包括以下几个方面： 1．传染性喉气管炎病毒烟台株TK基因的序列测定及TK蛋白结构功能初步分析 根据传染性喉气管炎病毒(ILTV)美国632株TK基因序列设计并合成1对引物，以烟台分离株为模板扩增了TK基因并对其进行了序列测定。结果表明，该基因包括1个1089 bp的完整开放阅读框架，可编码363个氨基酸组成的多肽。核苷酸序列比较分析发现，不同ILTV毒株之间TK基因相对保守，但与其他疱疹病毒之间同源性则比较低。氨基酸序列分析还发现，尽管与其他疱疹病毒的TK蛋白同源性较低，但ILTV TK蛋白也具有疱疹病毒胸苷激酶催化结构域的保守氨基酸共有序列：-DGXXGXGK-(ATP结合结构域)和-DRH-(核苷酸结合结构域)，以及5个保守的Cys残基。这些Cys残基可能是通过形成二硫键来维持TK蛋白氨基酸的功能构象，使ATP结合结构域与核苷酸结合结构域在空间上相互重叠，并与底物靠近发生反应，从而发挥TK蛋白的功能。 2．传染性喉气管炎病毒烟台株gE基因的序列测定及gE蛋白结构功能初步分析 根据传染性喉气管炎病毒(ILTV)美国标准攻毒毒株gE基因序列设计并合成1对引物，以烟台株为模板，PCR法扩增出1条1.5 kb的gE基因片段，并将其克隆至