黄瓜品质性状的AFLP和SCAR标记研究

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黄瓜(Cucumis sativus L. )属二倍体异花授粉一年生藤本植物,是我国保护地生产中产量最高的一种蔬菜作物,也是目前十种被广泛栽培的蔬菜系列之一。传统的黄瓜品种选育方法,只能从表型上选择,而不能从基因型、分子水平上选择。表型是基因型与环境共同作用的结果,各世代选择培育的环境条件又不可能完全一致,因此同一基因型的表现型在各世代也不完全相同,所以在常规育种中需要大面积的育种区,以尽一切可能减少优良基因型的丢失。尽管如此,传统育种方法仍难免顾此失彼,要选育出最佳基因型组合仍然十分困难。为此,育种学家们在传统育种的基础上不断探索新的育种方法。近年来,随着分子生物学技术的应用和发展,提出了分子辅助育种(Marker-assisted selection,简称MAS),它可以弥补传统育种方法的不足,提高其准确性并加速育种进程。优质的黄瓜品种一直是黄瓜育种家追求的目标,但由于黄瓜品质性状遗传基础的复杂性和研究的滞后,进行黄瓜优质品种转育较为困难,需时漫长,标记辅助选择技术的发展能极大地缩短传统育种的进程。如能获得与优良品质性状紧密连锁的分子标记,就能够通过分子标记辅助育种技术,准确、快速地选择或转育优质性状,缩短育种年限,加速育种进程。同时,获得与优良品质性状紧密连锁的分子标记,可为克隆控制该性状的基因并深入研究该性状形成的分子机制等奠定基础。本试验利用两个黄瓜品质性状相对的高代黄瓜自交系及其所衍生的F1代、F2代为试材,采用AFLP技术,获得了一个与黄瓜品质性状紧密连锁的标记并成功转化为SCAR标记。主要研究结果如下:1.提取了高质量的黄瓜基因组DNA采用能减少果胶等多糖污染的改良CTAB法提取基因组DNA,用T10E1溶解后,1%琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色检测。结果显示,黄瓜基因组DNA带型表现整齐、清晰,大小在23kb左右。2.建立了适宜黄瓜AFLP分析的技术体系本试验以黄瓜为材料,通过对AFLP反应体系中DNA用量,预扩增产物稀释倍数等几个关键因素进行优化,建立了适宜黄瓜的AFLP体系,可用于黄瓜的遗传研究。25μL体系中酶切基因组DNA适宜用量为100ng,预扩增产物适宜稀释倍数为30倍。3.利用64对引物从亲本中发现了79条AFLP差异带选用64对引物组合,采用AFLP技术结合银染从亲本中发现79条差异带。4.克隆两条AFLP差异带的序列从79条差异带中克隆了其中两条差异明显,大小适当的差异带,并进行测序。测序后提交到NCBI数据库进行序列比对。比对结果显示其中长度为363bp的片段为黄瓜中新发现的片段,命名为V7T3A363。而长度为181bp的片段与已发现的黄瓜叶绿体ATP合成酶β亚基完全一致,命名为V7T5A181。5.将V7T3A363和V7T5A1812个AFLP标记成功转化为SCAR标记利用测序所得的序列,设计PCR引物进行F2代验证。验证发现两对引物均在F2代出现分离,经过软件分析发现,V7T3A363与果皮纯颜色/杂色性状的遗传距离为36.36cM,与果皮的光泽性状遗传距离为34.09cM。V7T5A181与果皮纯颜色/杂色性状的遗传距离为13.64cM,与果皮的光泽性状遗传距离为9.09cM。
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