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Compound48/80(C48/80)和P物质(SP)等许多刺激物可直接激活过敏性疾病的关键效应器肥大细胞(MC),这些物质通过直接激活肥大细胞上的Mas相关G蛋白偶联受体X2(MRGPRX2)从而导致其脱颗粒,引起非Ig E依赖机制介导的假性过敏。目的:本研究采用C48/80诱导的RBL-2H3细胞模型及小鼠被动皮肤过敏反应(PCA)模型、小鼠全身主动系统过敏反应(ASA)模型研究了尿囊素对假性过敏的影响,并对其作用机制进行初步研究。方法:体外实验:1、MTT法检测RBL-2H3细胞活力;2、分光光度法测定C48/80刺激的RBL-2H3细胞培养上清液中β-氨基己糖胺酶(β-Hex)的释放量;3、观察及检测C48/80刺激的RBL-2H3细胞脱颗粒的相关指标:(1)ELISA法测定细胞培养上清液中组胺(HIS)、IL-8、TNF-α、MCP-1的含量;(2)甲苯胺蓝染色法观察肥大的细胞形态;(3)iFluor488荧光染色法观察细胞膜结构的F-actin;(4)Hoechst33258染色法观察细胞凋亡情况;(5)Fluo-4-AM染色法检测细胞内钙离子浓度;(6)Western blot法检测与假性过敏反应相关蛋白P-PI3R/P-PLCγ的表达。体内实验:1、C48/80诱导建立小鼠PCA模型:(1)分光光度法测定小鼠皮肤组织中伊文思蓝的含量;(2)游标卡尺测量小鼠足趾肿胀厚度并计算其足趾肿胀率;(3)游标卡尺测量小鼠背部皮肤蓝斑直径;(4)HE染色和甲苯胺蓝染色法观察小鼠皮肤组织的病理改变及肥大细胞的分布。2、采用C48/80诱导建立小鼠ASA模型:(1)体温计测量小鼠肛温;(2)ELISA法测定小鼠血清中HIS、IL-8、TNF-α的含量。结果:体外实验:1、尿囊素对RBL-2H3细胞活力的影响结果表明,不同浓度尿囊素(0μM、3.75μM、7.5μM、15μM、30μM、60μM、120μM)对RBL-2H3细胞活力无显著性影响。2、尿囊素对C48/80刺激的RBL-2H3细胞上清中β-Hex释放量的影响结果表明,尿囊素30μM和60μM浓度能够显著抑制细胞上清液中β-Hex的释放量。3、尿囊素对C48/80刺激的RBL-2H3细胞脱颗粒的影响(1)ELISA实验结果表明,尿囊素30μM和60μM浓度能够显著降低C48/80刺激的RBL-2H3细胞上清液中HIS、IL-8、TNF-α、MCP-1的含量;(2)甲苯胺蓝实验结果表明,尿囊素30μM和60μM浓度能够抑制C48/80刺激的RBL-2H3细胞形态的改变;(3)i Fluor488荧光染色实验结果表明,尿囊素30μM和60μM浓度可以改善C48/80刺激的RBL-2H3细胞中膜结构F-actin的重组;(4)Hoechst33258染色实验结果表明,尿囊素30μM和60μM浓度可以抑制C48/80刺激的RBL-2H3细胞的凋亡;(5)Fluo-4-AM染色实验结果表明,尿囊素30μM和60μM浓度可以降低C48/80刺激的RBL-2H3细胞内钙离子浓度;(6)Western blot实验结果表明,尿囊素30μM和60μM浓度能够降低C48/80刺激的RBL-2H3细胞中假性过敏相关蛋白P-PI3R/P-PLCγ的表达,其中60μM能显著降低P-PI3R/P-PLCγ的蛋白的表达。体内实验:1、尿囊素对C48/80诱导的小鼠PCA模型的影响(1)实验结果表明,尿囊素25mg/kg和50mg/kg给药组可显著降低小鼠背部皮肤和足趾皮肤组织中伊文思蓝的外渗。足趾肿胀率和背部皮肤伊文思蓝渗出蓝斑直径的结果表明,尿囊素25mg/kg和50mg/kg给药组能显著降低小鼠的足趾肿胀率和直径。(2)HE染色结果表明,尿囊素25mg/kg和50mg/kg给药组可降低炎性细胞的浸润。甲苯胺蓝染色结果表明,尿囊素25mg/kg和50mg/kg给药组能降低位于足趾皮肤和背部皮肤中的肥大细胞脱颗粒。2、尿囊素对C48/80诱导的小鼠ASA模型的影响实验结果表明,尿囊素25mg/kg和50mg/kg给药组可显著增高ASA小鼠体温。此外,尿囊素25mg/kg和50mg/kg给药组能显著降低模型组小鼠血清中组胺(HIS)、TNF-α、IL-8和MCP-1的含量。结论:尿囊素在体内外均对假性过敏反应具有较强的抑制作用,这可能与抑制Ca2+/PLCγ/IP3R信号通路有关,表明尿囊素可能用于非Ig E介导的抗过敏和抗炎疾病的治疗。