【摘 要】
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戊型肝炎病毒（hepatitis E virus,HEV）是一种经肠道传播,可以跨种间感染人和多种动物,严重危害人类健康的病毒性肝炎病原体。戊型肝炎在全球不断暴发流行,据WHO统计报道,全球每年约有2000万人感染戊肝,7万人死亡。尤其在一些发展中国家戊型肝炎发病率较高,且呈现持续增长的趋势。目前发现HEV有8种基因型,中国主要流行基因IV型HEV。目前仍未发现能够有效的、特异性治疗HEV的药物。
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戊型肝炎病毒（hepatitis E virus,HEV）是一种经肠道传播,可以跨种间感染人和多种动物,严重危害人类健康的病毒性肝炎病原体。戊型肝炎在全球不断暴发流行,据WHO统计报道,全球每年约有2000万人感染戊肝,7万人死亡。尤其在一些发展中国家戊型肝炎发病率较高,且呈现持续增长的趋势。目前发现HEV有8种基因型,中国主要流行基因IV型HEV。目前仍未发现能够有效的、特异性治疗HEV的药物。虽然临床利用非处方的广谱抗病毒药物进行治疗,如利巴韦林和干扰素,但是这些药物不但不能完全清除患者体内的病毒,还会产生耐药株,甚至导致患者出现贫血、外周血白细胞和血小板减少等副作用。因而,抗HEV药物的筛选成为目前研究的热点及难点。本文旨构建抗HEV药物筛选平台,并在细胞水平研究不同药物对HEV复制的影响,为筛选抗HEV药物奠定基础。本研究的主要工作包括3个部分:（1）体外培养HEV模型的建立;（2）EGFP-HEV重组病毒的构建;（3）抗HEV药物的筛选。（1）体外培养HEV模型的建立病毒培养是研究病毒复制机制及致病机理的基础,病毒的体外培养一直是研究的重点、热点及难点。为了探究HEV是否能够成功在Huh7.5.1细胞中复制,我们用HEV毒株接种细胞并连续培养多代。结果显示,在Huh7.5.1细胞中HEV病毒拷贝能够持续增长,且能够连续培养多代。同时,我们通过免疫荧光法标记HEV ORF2特异性蛋白发现随着时间的增长HEV ORF2荧光在细胞内逐渐增加且信号逐渐增强,说明HEV在体外成功且大量复制。（2）EGFP-HEV重组病毒的构建为了能够更直观的观察HEV病毒的复制情况,本文利用反向遗传学技术将HEV全长与EGFP基因重组,成功构建EGFP-HEV重组病毒,并转染Huh7.5.1细胞和感染BALB/c裸鼠进行验证。观察到重组病毒能够在细胞内正常复制,而且利用活体成像技术在裸鼠体内能够观察到荧光,且在裸鼠器官内检测到HEV,表明EGFP-HEV重组病毒构建成功。（3）抗HEV药物的筛选为进一步筛选抗HEV药物,本文利用前期实验成功构建的HEV体外培养模型和EGFP-HEV重组病毒感染Huh7.5.1细胞,通过该平台添加利巴韦林、干扰素α/2β、索非布韦、甘草酸苷、水飞蓟素、护肝片和舒肝颗粒7种药物观察对HEV复制的影响,并收集不同时间点的细胞进行定量分析及荧光观察,发现细胞定量的结果与荧光观察结果相符。表明该模型能够成功模拟HEV的复制,为进一步筛选抗HEV的药物奠定了基础。
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