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戊型肝炎(Hepatitis E,HE)是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)所引起的病毒性肝炎。HEV是单股正链RNA病毒,基因组全长7.2 kb,包含3个开放阅读框(Open Reading Frame,ORF),其中ORF2负责编码戊型肝炎病毒唯一的衣壳蛋白,共包含660个氨基酸,该蛋白参与了病毒组装、免疫及病毒细胞相互作用。近年来,HEV已逐渐成为全球范围内引发急性病毒性肝炎的最主要原因之一。孕妇与老年人是主要高危人群。戊型肝炎病例的病死率约为0.2～4%,孕妇感染HEV的病死率可高达10～25%。本研究通过对p239类病毒颗粒荧光标记不同方案的比较,最终确定了应用生物素-链亲和素荧光信号放大系统对p239进行标记。此外,将最初的抗原特异性记忆B细胞的染色方案进行了优化,去除了 CD3/CD14/IgM这三个指标。以CD20/CD27/IgG/p239为特异性标志物,筛选一位体内HEV抗体滴度较高的接种过戊型肝炎疫苗的志愿者,分离外周血,得到识别戊型肝炎病毒类病毒颗粒p239的特异性记忆B细胞。通过单细胞RT-PCR技术,获得了 10株人源HEV单克隆抗体。而这10株中的T183具有较高的中和活性。通过检测抗体与E2s突变蛋白的反应性,以及比较抗体阻断不同分区鼠单抗的能力,可以发现人源HEV单抗主要识别C2/C3/C5/C6分区鼠单抗所对应的免疫表位,特别是G591、P592两个氨基酸位点所形成的免疫表位,进一步佐证了前期研究对于这些表位为免疫优势表位的分析。本研究成功建立了 HEV人源抗体筛选平台,该平台应用了流式细胞术、单细胞PCR等技术,能够在最短28天内获得病原体特异的人源单克隆抗体,对于防控新发传染病的爆发流行具有重要意义。随着肿瘤免疫治疗研究的逐渐深入,人源单克隆抗体的应用范围不断拓展,市场需求也逐渐增加,该平台的建立为下一阶段对于肿瘤治疗的研究提供了技术支持。